军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2010年
6期
523-527,535
,共6页
许英晨%周军年%曾泉%袁红丰%岳文%裴雪涛
許英晨%週軍年%曾泉%袁紅豐%嶽文%裴雪濤
허영신%주군년%증천%원홍봉%악문%배설도
微小RNAs%miR-7%pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP真核表达载体%细胞增殖
微小RNAs%miR-7%pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP真覈錶達載體%細胞增殖
미소RNAs%miR-7%pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP진핵표체재체%세포증식
目的 构建miR-7 真核表达载体,以研究miR-7过表达后对细胞增殖能力的影响.方法 以人全血标本基因组为模板,PCR扩增miR-7序列,然后将该序列克隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP载体中,构建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体.将构建好的载体瞬时转染入293FT细胞中,利用RT-PCR技术对转染前后293FT细胞中miR-7的表达水平进行检测.将pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体瞬时转染入乳腺癌细胞系MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后细胞增殖能力的变化.结果 构建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定结果正确,实时定量RT-PCR结果表明,与转染pHRS-1cla-CMV-EGFP对照载体细胞相比,转染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体72 h后的293FT细胞成功地过表达miR-7达76.8倍.CCK-8法以及BrdU增殖实验检测过表达miR-7后乳腺癌细胞系MCF-7的增殖能力显著性下降(P<0.05).结论 成功构建了pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒表达载体,瞬时转染后细胞可以有效地高表达miR-7,同时证明过表达miR-7可以使细胞的增殖能力受到明显抑制.
目的 構建miR-7 真覈錶達載體,以研究miR-7過錶達後對細胞增殖能力的影響.方法 以人全血標本基因組為模闆,PCR擴增miR-7序列,然後將該序列剋隆入pHRS-1cla-CMV-EGFP載體中,構建pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒錶達載體.將構建好的載體瞬時轉染入293FT細胞中,利用RT-PCR技術對轉染前後293FT細胞中miR-7的錶達水平進行檢測.將pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒錶達載體瞬時轉染入乳腺癌細胞繫MCF-7中,利用CCK-8法以及BrdU增殖實驗檢測過錶達miR-7後細胞增殖能力的變化.結果 構建的pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒錶達載體質粒酶切和測序鑒定結果正確,實時定量RT-PCR結果錶明,與轉染pHRS-1cla-CMV-EGFP對照載體細胞相比,轉染pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒錶達載體72 h後的293FT細胞成功地過錶達miR-7達76.8倍.CCK-8法以及BrdU增殖實驗檢測過錶達miR-7後乳腺癌細胞繫MCF-7的增殖能力顯著性下降(P<0.05).結論 成功構建瞭pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP慢病毒錶達載體,瞬時轉染後細胞可以有效地高錶達miR-7,同時證明過錶達miR-7可以使細胞的增殖能力受到明顯抑製.
목적 구건miR-7 진핵표체재체,이연구miR-7과표체후대세포증식능력적영향.방법 이인전혈표본기인조위모판,PCR확증miR-7서렬,연후장해서렬극륭입pHRS-1cla-CMV-EGFP재체중,구건pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP만병독표체재체.장구건호적재체순시전염입293FT세포중,이용RT-PCR기술대전염전후293FT세포중miR-7적표체수평진행검측.장pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP만병독표체재체순시전염입유선암세포계MCF-7중,이용CCK-8법이급BrdU증식실험검측과표체miR-7후세포증식능력적변화.결과 구건적pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP만병독표체재체질립매절화측서감정결과정학,실시정량RT-PCR결과표명,여전염pHRS-1cla-CMV-EGFP대조재체세포상비,전염pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP만병독표체재체72 h후적293FT세포성공지과표체miR-7체76.8배.CCK-8법이급BrdU증식실험검측과표체miR-7후유선암세포계MCF-7적증식능력현저성하강(P<0.05).결론 성공구건료pHRS-1cla-miR-7-CMV-EGFP만병독표체재체,순시전염후세포가이유효지고표체miR-7,동시증명과표체miR-7가이사세포적증식능력수도명현억제.
