济宁医学院学报
濟寧醫學院學報
제저의학원학보
JOURNAL OF JINING MEDICAL COLLEGE
2011年
2期
77-80
,共4页
袁丽丽%姜海燕%杜红梅%崔运河%孔佑华%张慧
袁麗麗%薑海燕%杜紅梅%崔運河%孔祐華%張慧
원려려%강해연%두홍매%최운하%공우화%장혜
神经干细胞%培养%凋亡%促红细胞生成素
神經榦細胞%培養%凋亡%促紅細胞生成素
신경간세포%배양%조망%촉홍세포생성소
目的 探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对体外培养神经干细胞(neural stem cells,NSCs)凋亡的影响,为NSCs移植治疗脑损伤和脑部疾病提供实验依据.方法 孕14 d(El4)大鼠取鼠胚脑皮质悬浮培养、贴壁诱导分化.采用光电镜观察,用免疫细胞化学染色以Nestin蛋白作为鉴定NSCs的标记物,以MAP2、GFAP蛋白检测NSCs的分化.取第3代(P3)NSCs向悬浮培养基中分别添加不同剂量的EPO,EPO浓度分别为0.5U/ml,5U/ml,50U/ml,500U/ml,并设不添加EPO的对照组,通过Caspase-3蛋白检测NSCs的凋亡.结果 1)提取和分离E14d SD大鼠的胚脑皮质,在添加B27、bFGF、EGF的无血清培养基中培养,可形成大量悬浮的神经球并可进行体外扩增传代,神经球内的细胞均呈Nestin阳性、BrdU阳性.在添加10%胎牛血清的培养基中,神经干细胞可自然分化为神经元和神经胶质细胞.2)加入≥5U/ml EPO,神经球内Caspase-3的表达显著下降(P<0.01).结论 1)大鼠胚胎脑皮质体外培养可得到大量增殖的NSCs并能分化为神经元和神经胶质细胞,为NSCs的研究提供了适宜的细胞培养模型.2)加入≥5U/ml EPO可降低体外培养的鼠胚脑皮质NSCs的凋亡率.
目的 探討促紅細胞生成素(erythropoietin,EPO)對體外培養神經榦細胞(neural stem cells,NSCs)凋亡的影響,為NSCs移植治療腦損傷和腦部疾病提供實驗依據.方法 孕14 d(El4)大鼠取鼠胚腦皮質懸浮培養、貼壁誘導分化.採用光電鏡觀察,用免疫細胞化學染色以Nestin蛋白作為鑒定NSCs的標記物,以MAP2、GFAP蛋白檢測NSCs的分化.取第3代(P3)NSCs嚮懸浮培養基中分彆添加不同劑量的EPO,EPO濃度分彆為0.5U/ml,5U/ml,50U/ml,500U/ml,併設不添加EPO的對照組,通過Caspase-3蛋白檢測NSCs的凋亡.結果 1)提取和分離E14d SD大鼠的胚腦皮質,在添加B27、bFGF、EGF的無血清培養基中培養,可形成大量懸浮的神經毬併可進行體外擴增傳代,神經毬內的細胞均呈Nestin暘性、BrdU暘性.在添加10%胎牛血清的培養基中,神經榦細胞可自然分化為神經元和神經膠質細胞.2)加入≥5U/ml EPO,神經毬內Caspase-3的錶達顯著下降(P<0.01).結論 1)大鼠胚胎腦皮質體外培養可得到大量增殖的NSCs併能分化為神經元和神經膠質細胞,為NSCs的研究提供瞭適宜的細胞培養模型.2)加入≥5U/ml EPO可降低體外培養的鼠胚腦皮質NSCs的凋亡率.
목적 탐토촉홍세포생성소(erythropoietin,EPO)대체외배양신경간세포(neural stem cells,NSCs)조망적영향,위NSCs이식치료뇌손상화뇌부질병제공실험의거.방법 잉14 d(El4)대서취서배뇌피질현부배양、첩벽유도분화.채용광전경관찰,용면역세포화학염색이Nestin단백작위감정NSCs적표기물,이MAP2、GFAP단백검측NSCs적분화.취제3대(P3)NSCs향현부배양기중분별첨가불동제량적EPO,EPO농도분별위0.5U/ml,5U/ml,50U/ml,500U/ml,병설불첨가EPO적대조조,통과Caspase-3단백검측NSCs적조망.결과 1)제취화분리E14d SD대서적배뇌피질,재첨가B27、bFGF、EGF적무혈청배양기중배양,가형성대량현부적신경구병가진행체외확증전대,신경구내적세포균정Nestin양성、BrdU양성.재첨가10%태우혈청적배양기중,신경간세포가자연분화위신경원화신경효질세포.2)가입≥5U/ml EPO,신경구내Caspase-3적표체현저하강(P<0.01).결론 1)대서배태뇌피질체외배양가득도대량증식적NSCs병능분화위신경원화신경효질세포,위NSCs적연구제공료괄의적세포배양모형.2)가입≥5U/ml EPO가강저체외배양적서배뇌피질NSCs적조망솔.
