CAJ | 학술논문

草鱼出血病是危害中国淡水养殖最为重要的病害之一,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp hemorrhage virus,GCRV),其中,HZ08株是当前引起草鱼出血病的主要流行毒株.为建立一种快速、灵敏、特异的草鱼呼肠孤病毒主要流行株检测方法,本研究利用草鱼呼肠孤病毒HZ08株S7基因保守区,设计了一对能特异性扩增154 bp片段的引物和TaqMan探针,用含有S7基因全长的重组质粒PAVX1-S7作为标准品,构建质粒拷贝数与CT值的标准曲线,并对该方法的特异性、可重复性、敏感度进行评价.结果显示:标准曲线在6.0×1010～6.0拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999)；实时荧光定量PCR最少可检测到6个阳性质粒,有较高的敏感性；试验内及试验间变异系数分别为0.82％与0.41％～ 0.52％,重复性强；对水生动物其他病毒均无扩增反应,具有很好的特异性.应用该方法对采集的32份草鱼出血病样品进行检测,其中28份为阳性,而以常规RT-PCR检测同样的样品,仅23份为阳性.本研究建立的草鱼呼肠孤病毒流行株实时荧光定量PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面具有较好的测试结果,在GCRV的快速检测和病毒初步定量中应用前景乐观.
초어출혈병시위해중국담수양식최위중요적병해지일,기병원위초어호장고병독(grass carp hemorrhage virus,GCRV),기중,HZ08주시당전인기초어출혈병적주요류행독주.위건립일충쾌속、령민、특이적초어호장고병독주요류행주검측방법,본연구이용초어호장고병독HZ08주S7기인보수구,설계료일대능특이성확증154 bp편단적인물화TaqMan탐침,용함유S7기인전장적중조질립PAVX1-S7작위표준품,구건질립고패수여CT치적표준곡선,병대해방법적특이성、가중복성、민감도진행평개.결과현시:표준곡선재6.0×1010～6.0고패수지간유흔호적선성관계(r=0.999)；실시형광정량PCR최소가검측도6개양성질립,유교고적민감성；시험내급시험간변이계수분별위0.82％여0.41％～ 0.52％,중복성강；대수생동물기타병독균무확증반응,구유흔호적특이성.응용해방법대채집적32빈초어출혈병양품진행검측,기중28빈위양성,이이상규RT-PCR검측동양적양품,부23빈위양성.본연구건립적초어호장고병독류행주실시형광정량PCR검측방법재특이성、령민도、중복성방면구유교호적측시결과,재GCRV적쾌속검측화병독초보정량중응용전경악관.