岭南现代临床外科
嶺南現代臨床外科
령남현대림상외과
LINGNAN MODERN CLINICS IN SURGERY
2012年
2期
92-95,102
,共5页
邱荣林%邓小耿%谢平%李治熹%唐晶
邱榮林%鄧小耿%謝平%李治熹%唐晶
구영림%산소경%사평%리치희%당정
MicroRNA-122%载体构建%慢病毒
MicroRNA-122%載體構建%慢病毒
MicroRNA-122%재체구건%만병독
目的 构建携带miR-122的重组慢病毒表达载体,为研究miR-122的功能和作用机制奠定基础.方法 从小鼠基因组DNA采用PCR法扩增出pre-miR-122基因,测序后克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP逆转录病毒载体上,测序鉴定,病毒包装后,转染NIH3T3细胞,并通过绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定.将重组慢病毒感染肝前体细胞(HPCs),利用实时定量PCR检测miR-122的表达.结果 重组慢病毒载体pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP经PCR扩增及测序鉴定正确,并得到了滴度为(1-5)×106 IU/mL的病毒液.pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP感染的肝前体细胞中miR-122表达显著增强.结论 成功构建了小鼠miR-122重组慢病毒,并在肝前体细胞中高效表达出miR-122,为进行miR-122的功能和机理奠定了良好的基础.
目的 構建攜帶miR-122的重組慢病毒錶達載體,為研究miR-122的功能和作用機製奠定基礎.方法 從小鼠基因組DNA採用PCR法擴增齣pre-miR-122基因,測序後剋隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP逆轉錄病毒載體上,測序鑒定,病毒包裝後,轉染NIH3T3細胞,併通過綠色熒光蛋白進行病毒滴度測定.將重組慢病毒感染肝前體細胞(HPCs),利用實時定量PCR檢測miR-122的錶達.結果 重組慢病毒載體pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP經PCR擴增及測序鑒定正確,併得到瞭滴度為(1-5)×106 IU/mL的病毒液.pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP感染的肝前體細胞中miR-122錶達顯著增彊.結論 成功構建瞭小鼠miR-122重組慢病毒,併在肝前體細胞中高效錶達齣miR-122,為進行miR-122的功能和機理奠定瞭良好的基礎.
목적 구건휴대miR-122적중조만병독표체재체,위연구miR-122적공능화작용궤제전정기출.방법 종소서기인조DNA채용PCR법확증출pre-miR-122기인,측서후극륭지pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP역전록병독재체상,측서감정,병독포장후,전염NIH3T3세포,병통과록색형광단백진행병독적도측정.장중조만병독감염간전체세포(HPCs),이용실시정량PCR검측miR-122적표체.결과 중조만병독재체pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP경PCR확증급측서감정정학,병득도료적도위(1-5)×106 IU/mL적병독액.pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP감염적간전체세포중miR-122표체현저증강.결론 성공구건료소서miR-122중조만병독,병재간전체세포중고효표체출miR-122,위진행miR-122적공능화궤리전정료량호적기출.
