安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
14期
8077-8079
,共3页
苏建青%褚秀玲%马秀亮%江成%张吉清
囌建青%褚秀玲%馬秀亮%江成%張吉清
소건청%저수령%마수량%강성%장길청
犬瘟热病毒%SLAM%稳定细胞系
犬瘟熱病毒%SLAM%穩定細胞繫
견온열병독%SLAM%은정세포계
[目的]构建稳定表达犬瘟热病毒细胞受体——犬信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的非洲绿猴肾细胞株(Vero).[方法]采用RT-PCR方法从犬外周血淋巴细胞中扩增出SLAM基因,将其克隆到哺乳动物真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1/SLAM.采用脂质体将peDNA3.1/SLAM转染到Vero细胞中,利用G418加压筛选和纯化培养获得稳定表达SLAM的重组Vero细胞株.应用RT-PCR和间接免疫荧光试验检测SLAM的表达.[结果]重组蛋白SLAM在Vero细胞中获得表达,并且在不同代次的阳性细胞株中均能稳定表达目的蛋白.[结论]该研究建立了稳定表达犬SLAM的细胞株Vero/SLAM,为犬瘟热病毒的分离和生物学特性研究提供了平台.
[目的]構建穩定錶達犬瘟熱病毒細胞受體——犬信號淋巴細胞激活因子(SLAM)的非洲綠猴腎細胞株(Vero).[方法]採用RT-PCR方法從犬外週血淋巴細胞中擴增齣SLAM基因,將其剋隆到哺乳動物真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,構建重組質粒pcDNA3.1/SLAM.採用脂質體將peDNA3.1/SLAM轉染到Vero細胞中,利用G418加壓篩選和純化培養穫得穩定錶達SLAM的重組Vero細胞株.應用RT-PCR和間接免疫熒光試驗檢測SLAM的錶達.[結果]重組蛋白SLAM在Vero細胞中穫得錶達,併且在不同代次的暘性細胞株中均能穩定錶達目的蛋白.[結論]該研究建立瞭穩定錶達犬SLAM的細胞株Vero/SLAM,為犬瘟熱病毒的分離和生物學特性研究提供瞭平檯.
[목적]구건은정표체견온열병독세포수체——견신호림파세포격활인자(SLAM)적비주록후신세포주(Vero).[방법]채용RT-PCR방법종견외주혈림파세포중확증출SLAM기인,장기극륭도포유동물진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,구건중조질립pcDNA3.1/SLAM.채용지질체장peDNA3.1/SLAM전염도Vero세포중,이용G418가압사선화순화배양획득은정표체SLAM적중조Vero세포주.응용RT-PCR화간접면역형광시험검측SLAM적표체.[결과]중조단백SLAM재Vero세포중획득표체,병차재불동대차적양성세포주중균능은정표체목적단백.[결론]해연구건립료은정표체견SLAM적세포주Vero/SLAM,위견온열병독적분리화생물학특성연구제공료평태.
