CAJ | 학술논문

目的筛选强效抑制生存素Survivin基因表达的小干扰核糖核酸(siRNA),探讨Survivin基因抑制对小鼠结肠癌细胞凋亡的影响.方法根据siRNA的设计规则和Survivin序列,设计3段侯选siRNA,聚合酶链反应(PCR)法制备表达框;将siRNA表达框与Survivin-绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因表达质粒(pSurvivin-EGFP)共转染293T细胞,24～48 h后根据荧光强度筛选强效siRNA;再制备其表达质粒转染小鼠结肠癌CT26细胞,应用实时荧光定量(FQ)-聚合酶链反应和蛋白印迹(Western blot)法分析Survivin基因的表达;DNA末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪(FCM)Annexin V/丙化碘锭(PI)双染色法检测细胞凋亡.结果筛选出1段高效抑制Survivin表达的siRNA,可使CT26细胞内Survivin mRNA拷贝数明显减少,抑制率为86.9%;蛋白表达水平亦显著降低;TUNEL检测显示转染48 h后RNA干扰组和对照组凋亡细胞数分别为(60.13±5.71)个和(5.47±0.63)个,两组差异有统计学意义(P＜0.01);FCM检测转染后1、2、3、4 d凋亡细胞比率分别为2.1%、4.9%、11.7%和32.6%,对照组4个时间点凋亡率均低于1.5%,两组差异有统计学意义(P＜0.01).结论siRNA能有效抑制小鼠结肠癌CT26细胞内Survivin基因表达并诱导结肠癌细胞凋亡.
목적사선강효억제생존소Survivin기인표체적소간우핵당핵산(siRNA),탐토Survivin기인억제대소서결장암세포조망적영향.방법근거siRNA적설계규칙화Survivin서렬,설계3단후선siRNA,취합매련반응(PCR)법제비표체광;장siRNA표체광여Survivin-록색형광단백(EGFP)융합기인표체질립(pSurvivin-EGFP)공전염293T세포,24～48 h후근거형광강도사선강효siRNA;재제비기표체질립전염소서결장암CT26세포,응용실시형광정량(FQ)-취합매련반응화단백인적(Western blot)법분석Survivin기인적표체;DNA말단표기(TUNEL)법화류식세포의(FCM)Annexin V/병화전정(PI)쌍염색법검측세포조망.결과사선출1단고효억제Survivin표체적siRNA,가사CT26세포내Survivin mRNA고패수명현감소,억제솔위86.9%;단백표체수평역현저강저;TUNEL검측현시전염48 h후RNA간우조화대조조조망세포수분별위(60.13±5.71)개화(5.47±0.63)개,량조차이유통계학의의(P＜0.01);FCM검측전염후1、2、3、4 d조망세포비솔분별위2.1%、4.9%、11.7%화32.6%,대조조4개시간점조망솔균저우1.5%,량조차이유통계학의의(P＜0.01).결론siRNA능유효억제소서결장암CT26세포내Survivin기인표체병유도결장암세포조망.