中国热带医学
中國熱帶醫學
중국열대의학
CHINA TROPICAL MEDICINE
2006年
6期
941-943
,共3页
何汉江%汪文玉%李丽华%谭立志%刘传爱%占利生
何漢江%汪文玉%李麗華%譚立誌%劉傳愛%佔利生
하한강%왕문옥%리려화%담립지%류전애%점리생
钩端螺旋体%外膜脂蛋白%DNA疫苗%真核表达
鉤耑螺鏇體%外膜脂蛋白%DNA疫苗%真覈錶達
구단라선체%외막지단백%DNA역묘%진핵표체
目的构建钩端螺旋体外膜脂蛋白Lipl21基因片段的真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染HeLa细胞,探讨其在体外真核细胞中的表达情况,为寻找新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子提供实验依据. 方法应用PCR技术从钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株基因组模板中扩增Lipl21基因,纯化回收后克隆入pUCM-T载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),运用脂质体2000将重组体pcDNA3.1(+)/LipL21转染入HeLa细胞,免疫组化法观察目的基因的表达. 结果双酶切及测序鉴定证明成功构建LipL21真核表达重组体pcDNA3.1(+)/LipL21,DNA测序显示重组质粒含有561bp的目的基因片段,读码框架正确,无碱基错配及移码突变.重组质粒pcDNA3.1(+)/LipL21在体外HeLa细胞中能有效表达目的蛋白LipL21. 结论成功构建了钩端螺旋体Lipl21基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Lipl21,且能够在体外真核细胞中表达,为进一步筛选新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子奠定了一定的实验基础.
目的構建鉤耑螺鏇體外膜脂蛋白Lipl21基因片段的真覈錶達重組質粒,利用脂質體體外轉染HeLa細胞,探討其在體外真覈細胞中的錶達情況,為尋找新的預防鉤耑螺鏇體病的候選疫苗分子提供實驗依據. 方法應用PCR技術從鉤耑螺鏇體黃疸齣血群賴型56601株基因組模闆中擴增Lipl21基因,純化迴收後剋隆入pUCM-T載體,再亞剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1(+),運用脂質體2000將重組體pcDNA3.1(+)/LipL21轉染入HeLa細胞,免疫組化法觀察目的基因的錶達. 結果雙酶切及測序鑒定證明成功構建LipL21真覈錶達重組體pcDNA3.1(+)/LipL21,DNA測序顯示重組質粒含有561bp的目的基因片段,讀碼框架正確,無堿基錯配及移碼突變.重組質粒pcDNA3.1(+)/LipL21在體外HeLa細胞中能有效錶達目的蛋白LipL21. 結論成功構建瞭鉤耑螺鏇體Lipl21基因真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)/Lipl21,且能夠在體外真覈細胞中錶達,為進一步篩選新的預防鉤耑螺鏇體病的候選疫苗分子奠定瞭一定的實驗基礎.
목적구건구단라선체외막지단백Lipl21기인편단적진핵표체중조질립,이용지질체체외전염HeLa세포,탐토기재체외진핵세포중적표체정황,위심조신적예방구단라선체병적후선역묘분자제공실험의거. 방법응용PCR기술종구단라선체황달출혈군뢰형56601주기인조모판중확증Lipl21기인,순화회수후극륭입pUCM-T재체,재아극륭입진핵표체재체pcDNA3.1(+),운용지질체2000장중조체pcDNA3.1(+)/LipL21전염입HeLa세포,면역조화법관찰목적기인적표체. 결과쌍매절급측서감정증명성공구건LipL21진핵표체중조체pcDNA3.1(+)/LipL21,DNA측서현시중조질립함유561bp적목적기인편단,독마광가정학,무감기착배급이마돌변.중조질립pcDNA3.1(+)/LipL21재체외HeLa세포중능유효표체목적단백LipL21. 결론성공구건료구단라선체Lipl21기인진핵표체질립pcDNA3.1(+)/Lipl21,차능구재체외진핵세포중표체,위진일보사선신적예방구단라선체병적후선역묘분자전정료일정적실험기출.
