解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2007年
1期
61-63
,共3页
刁志宏%张明霞%朱幼芙%何海棠%王战会%侯金林
刁誌宏%張明霞%硃幼芙%何海棠%王戰會%侯金林
조지굉%장명하%주유부%하해당%왕전회%후금림
肝炎病毒,乙型%基因重组%真核表达
肝炎病毒,乙型%基因重組%真覈錶達
간염병독,을형%기인중조%진핵표체
目的 利用pEGFP-C2真核表达载体,建立稳定表达乙型肝炎病毒(HBV)P22e的HepG2细胞系.方法 以含1.2拷贝HBV基因(adr亚型)的p3.8Ⅱ质粒为模板,PCR获得HBVP22e cDNA片段,分离插入通用T载体pMD18-T中鉴定,然后装入真核表达型载体pEGFP-C2中,HBVP22e与EGFP基因融合,脂质体转染HepG2细胞株,荧光显微镜下观察EGFP-HBVP22e融合蛋白的胞内表达,Western blot检测阳性克隆细胞EGFP-HBVP22e的表达.结果 成功构建了真核表达载体pEGFP-C2HBVP22e,并转染HepG2细胞,经多次传代培养鉴定,获得稳定表达EGFP-HBVP22e融合蛋白的HepG2细胞系.结论 该细胞系的建立为进一步研究HBVP22e的生物学功能与乙型肝炎发病机制的关系奠定了基础.
目的 利用pEGFP-C2真覈錶達載體,建立穩定錶達乙型肝炎病毒(HBV)P22e的HepG2細胞繫.方法 以含1.2拷貝HBV基因(adr亞型)的p3.8Ⅱ質粒為模闆,PCR穫得HBVP22e cDNA片段,分離插入通用T載體pMD18-T中鑒定,然後裝入真覈錶達型載體pEGFP-C2中,HBVP22e與EGFP基因融閤,脂質體轉染HepG2細胞株,熒光顯微鏡下觀察EGFP-HBVP22e融閤蛋白的胞內錶達,Western blot檢測暘性剋隆細胞EGFP-HBVP22e的錶達.結果 成功構建瞭真覈錶達載體pEGFP-C2HBVP22e,併轉染HepG2細胞,經多次傳代培養鑒定,穫得穩定錶達EGFP-HBVP22e融閤蛋白的HepG2細胞繫.結論 該細胞繫的建立為進一步研究HBVP22e的生物學功能與乙型肝炎髮病機製的關繫奠定瞭基礎.
목적 이용pEGFP-C2진핵표체재체,건립은정표체을형간염병독(HBV)P22e적HepG2세포계.방법 이함1.2고패HBV기인(adr아형)적p3.8Ⅱ질립위모판,PCR획득HBVP22e cDNA편단,분리삽입통용T재체pMD18-T중감정,연후장입진핵표체형재체pEGFP-C2중,HBVP22e여EGFP기인융합,지질체전염HepG2세포주,형광현미경하관찰EGFP-HBVP22e융합단백적포내표체,Western blot검측양성극륭세포EGFP-HBVP22e적표체.결과 성공구건료진핵표체재체pEGFP-C2HBVP22e,병전염HepG2세포,경다차전대배양감정,획득은정표체EGFP-HBVP22e융합단백적HepG2세포계.결론 해세포계적건립위진일보연구HBVP22e적생물학공능여을형간염발병궤제적관계전정료기출.
