南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2007年
8期
825-828
,共4页
唐鹿群%张蕾%郭人花%刘丰%苏川%束永前
唐鹿群%張蕾%郭人花%劉豐%囌川%束永前
당록군%장뢰%곽인화%류봉%소천%속영전
热休克蛋白70%人端粒酶逆转录酶%融合基因%原核表达
熱休剋蛋白70%人耑粒酶逆轉錄酶%融閤基因%原覈錶達
열휴극단백70%인단립매역전록매%융합기인%원핵표체
目的:构建热休克蛋白70(HSP70)与人端粒酶逆转录酶融合表达载体,在大肠杆菌进行表达.方法:利用PCR方法扩增hTERT基因片段(532aa～637aa),双酶切后插入原核表达载体pET32a的Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ位点之间,形成pET32a-hTERT质粒.通过PCR方法扩增人HSP70全长cDNA.双酶切后插入pET32a-hTERT的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ位点之间,构建hTERT与HSP70的N端融合基因原核表达质粒pET32a-hTERT-HSP70.含有该质粒的大肠杆菌BL21经异丙醛-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果:成功的扩增了HSP70基因与hTERT基因片段;测序结果表明成功的构建了pET32a-hTERT-HSP70原核表达载体.含有该质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达约110 kD的蛋白.结论:HSP70与人端粒酶逆转录酶融合表达质粒构建成功,并成功获得了融合蛋白hTERT-HSP70.
目的:構建熱休剋蛋白70(HSP70)與人耑粒酶逆轉錄酶融閤錶達載體,在大腸桿菌進行錶達.方法:利用PCR方法擴增hTERT基因片段(532aa～637aa),雙酶切後插入原覈錶達載體pET32a的Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ位點之間,形成pET32a-hTERT質粒.通過PCR方法擴增人HSP70全長cDNA.雙酶切後插入pET32a-hTERT的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ位點之間,構建hTERT與HSP70的N耑融閤基因原覈錶達質粒pET32a-hTERT-HSP70.含有該質粒的大腸桿菌BL21經異丙醛-B-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達.結果:成功的擴增瞭HSP70基因與hTERT基因片段;測序結果錶明成功的構建瞭pET32a-hTERT-HSP70原覈錶達載體.含有該質粒的大腸桿菌BL21經誘導後錶達約110 kD的蛋白.結論:HSP70與人耑粒酶逆轉錄酶融閤錶達質粒構建成功,併成功穫得瞭融閤蛋白hTERT-HSP70.
목적:구건열휴극단백70(HSP70)여인단립매역전록매융합표체재체,재대장간균진행표체.방법:이용PCR방법확증hTERT기인편단(532aa～637aa),쌍매절후삽입원핵표체재체pET32a적Nco Ⅰ화EcoR Ⅰ위점지간,형성pET32a-hTERT질립.통과PCR방법확증인HSP70전장cDNA.쌍매절후삽입pET32a-hTERT적EcoR Ⅰ화Hind Ⅲ위점지간,구건hTERT여HSP70적N단융합기인원핵표체질립pET32a-hTERT-HSP70.함유해질립적대장간균BL21경이병철-B-D-류대반유당감(IPTG)유도표체.결과:성공적확증료HSP70기인여hTERT기인편단;측서결과표명성공적구건료pET32a-hTERT-HSP70원핵표체재체.함유해질립적대장간균BL21경유도후표체약110 kD적단백.결론:HSP70여인단립매역전록매융합표체질립구건성공,병성공획득료융합단백hTERT-HSP70.
