CAJ | 학술논문

背景:骨髓基质细胞持续稳定地向软骨细胞转化一过程中,物理、化学和生物等诸多因素均发挥着作用,某些因素的共同作用会更有利于细胞的转化,而转化生长因子β1和胰岛素样生长因子等均可诱导骨髓基质细胞向软骨细胞分化.目的:拟验证转化生长因子β1与胰岛素样生长因子在体外联合诱导犬骨髓基质细胞向软骨细胞分化的效果.设计、时间及地点:细胞观察,于2006-05/10在中山大学附属第三医院中心实验室完成.材料:清洁级12月龄雄性成年杂种犬1只,用于分离培养骨髓基质细胞.转化生长因子β1、胰岛素样生长因子I由美国Sigma公司生产.方法:自犬髂后嵴处抽取骨髓10mL,密度梯度法分离培养骨髓基质细胞,传至第3代,调整细胞密度为2×109L-1.诱导组向细胞内加入含10 μg/L转化生长因子β1、50 μg/L胰岛素样生长囚了I、50mg/L维生素C、10-7mol/L地塞米松、1%ITS-A、100U/mL青霉素、100 mg/L链霉素、10%胎牛血清的高糖DMEM培养基.对照组仪加入含10%胎牛血清的高糖DMEM进行常规培养.主要观察指标:诱导后细胞形态学变化.诱导后组织化学及免疫组化检测结果.结果:与对照组比较,第3代骨髓基质细胞成软骨诱导48 h后能明显促进细胞集落生长,细胞增殖加快,但细胞形态无变化,仍为长梭形;诱导14 d后大部分细胞呈多角形或圆形,折光性增强.诱导后番红O染色、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性表达.结论:转化生长因子β1与胰岛素样生长因子I体外联合诱导可获得骨髓基质细胞源性软骨细胞.
배경:골수기질세포지속은정지향연골세포전화일과정중,물리、화학화생물등제다인소균발휘착작용,모사인소적공동작용회경유리우세포적전화,이전화생장인자β1화이도소양생장인자등균가유도골수기질세포향연골세포분화.목적:의험증전화생장인자β1여이도소양생장인자재체외연합유도견골수기질세포향연골세포분화적효과.설계、시간급지점:세포관찰,우2006-05/10재중산대학부속제삼의원중심실험실완성.재료:청길급12월령웅성성년잡충견1지,용우분리배양골수기질세포.전화생장인자β1、이도소양생장인자I유미국Sigma공사생산.방법:자견가후척처추취골수10mL,밀도제도법분리배양골수기질세포,전지제3대,조정세포밀도위2×109L-1.유도조향세포내가입함10 μg/L전화생장인자β1、50 μg/L이도소양생장수료I、50mg/L유생소C、10-7mol/L지새미송、1%ITS-A、100U/mL청매소、100 mg/L련매소、10%태우혈청적고당DMEM배양기.대조조의가입함10%태우혈청적고당DMEM진행상규배양.주요관찰지표:유도후세포형태학변화.유도후조직화학급면역조화검측결과.결과:여대조조비교,제3대골수기질세포성연골유도48 h후능명현촉진세포집락생장,세포증식가쾌,단세포형태무변화,잉위장사형;유도14 d후대부분세포정다각형혹원형,절광성증강.유도후번홍O염색、갑분알람염색급Ⅱ형효원면역조화염색균정양성표체.결론:전화생장인자β1여이도소양생장인자I체외연합유도가획득골수기질세포원성연골세포.