医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
1期
36-39
,共4页
王桂玲%王孝会%周颖%陈薇%姜佩佳
王桂玲%王孝會%週穎%陳薇%薑珮佳
왕계령%왕효회%주영%진미%강패가
RIPX%绿色荧光蛋白%蛋白表达及定位%胃癌SGC-7901细胞
RIPX%綠色熒光蛋白%蛋白錶達及定位%胃癌SGC-7901細胞
RIPX%록색형광단백%단백표체급정위%위암SGC-7901세포
目的 构建真核表达载体pEGFP-RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达.方法 以pBluescriptR–RIPX为模板,采用PCR 法进行人RIPX 编码序列(ORF)的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中.将pEGFP-RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中,用Western印迹方法 检测GFP-RIPX融合蛋白的表达;用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位.结果 人的RIPX 编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;证实了GFP-RIPX融合蛋白的表达;转染pEGFP-RIPX 后,在胃癌SGC-7901 细胞胞质内可见明亮的绿色荧光.结论 成功地构建了pEGFP-RIPX 载体,鉴定了外源性RIPX 的表达;同时证实在胃癌SGC-7901 细胞中RIPX主要定位于细胞质,为进一步研究RIPX 的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础.
目的 構建真覈錶達載體pEGFP-RIPX,併鑒定RIPX在胃癌細胞中的定位,併檢測外源性RIPX的錶達.方法 以pBluescriptR–RIPX為模闆,採用PCR 法進行人RIPX 編碼序列(ORF)的擴增,併將其剋隆至真覈錶達載體pEGFP-C1中.將pEGFP-RIPX質粒瞬時轉染到胃癌SGC-7901細胞中,用Western印跡方法 檢測GFP-RIPX融閤蛋白的錶達;用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察RIPX的定位.結果 人的RIPX 編碼序列被成功剋隆至真覈錶達載體pEGFP-C1中;證實瞭GFP-RIPX融閤蛋白的錶達;轉染pEGFP-RIPX 後,在胃癌SGC-7901 細胞胞質內可見明亮的綠色熒光.結論 成功地構建瞭pEGFP-RIPX 載體,鑒定瞭外源性RIPX 的錶達;同時證實在胃癌SGC-7901 細胞中RIPX主要定位于細胞質,為進一步研究RIPX 的生物學特性及其信號轉導通路奠定瞭基礎.
목적 구건진핵표체재체pEGFP-RIPX,병감정RIPX재위암세포중적정위,병검측외원성RIPX적표체.방법 이pBluescriptR–RIPX위모판,채용PCR 법진행인RIPX 편마서렬(ORF)적확증,병장기극륭지진핵표체재체pEGFP-C1중.장pEGFP-RIPX질립순시전염도위암SGC-7901세포중,용Western인적방법 검측GFP-RIPX융합단백적표체;용격광소묘공취초현미경관찰RIPX적정위.결과 인적RIPX 편마서렬피성공극륭지진핵표체재체pEGFP-C1중;증실료GFP-RIPX융합단백적표체;전염pEGFP-RIPX 후,재위암SGC-7901 세포포질내가견명량적록색형광.결론 성공지구건료pEGFP-RIPX 재체,감정료외원성RIPX 적표체;동시증실재위암SGC-7901 세포중RIPX주요정위우세포질,위진일보연구RIPX 적생물학특성급기신호전도통로전정료기출.
