微生物学杂志
微生物學雜誌
미생물학잡지
JOURNAL OF MICROBIOLOGY
2011年
3期
35-40
,共6页
李国辉%唐琦%张俊红%郭旭丽%胡朝阳%姚勤
李國輝%唐琦%張俊紅%郭旭麗%鬍朝暘%姚勤
리국휘%당기%장준홍%곽욱려%호조양%요근
家蚕细小病毒样病毒%VD1%原核表达%抗体制备%漏扫描
傢蠶細小病毒樣病毒%VD1%原覈錶達%抗體製備%漏掃描
가잠세소병독양병독%VD1%원핵표체%항체제비%루소묘
对家蚕细小病毒样病毒(BmPLV-Z)VD1 ORF4理论上编码的氨基酸序列进行Blast搜索,结果表明其与DNA聚合酶B家族同源.通过PCR扩增其DNA聚合酶同源区(1077 bp),将扩增的目的DNA片段与原核表达载体pET30a进行连接,通过不同浓度的IPTG对捕获pET30a-10877 bp重组质粒的大肠埃希菌进行诱导,对诱导产物进行SDS-PAGE电泳,结果表明其聚合酶同源区获得了表达;Western blot分析进一步确证诱导蛋白为带有6个组氨酸的融合蛋白.将割胶获得的目的蛋白免疫昆明小鼠制备其多抗,以纯化后的抗血清对 VD1 ORF4全长序列和部分序列在原核中的漏扫描表达情况进行研究,SDS-PAGE和Western blot结果表明VD1 ORF4全长序列和部分序列的原核表达产物均一,都只有一条特异的目的蛋白带,说明了VD1 ORF4序列在原核表达系统中没有漏扫描表达的蛋白.
對傢蠶細小病毒樣病毒(BmPLV-Z)VD1 ORF4理論上編碼的氨基痠序列進行Blast搜索,結果錶明其與DNA聚閤酶B傢族同源.通過PCR擴增其DNA聚閤酶同源區(1077 bp),將擴增的目的DNA片段與原覈錶達載體pET30a進行連接,通過不同濃度的IPTG對捕穫pET30a-10877 bp重組質粒的大腸埃希菌進行誘導,對誘導產物進行SDS-PAGE電泳,結果錶明其聚閤酶同源區穫得瞭錶達;Western blot分析進一步確證誘導蛋白為帶有6箇組氨痠的融閤蛋白.將割膠穫得的目的蛋白免疫昆明小鼠製備其多抗,以純化後的抗血清對 VD1 ORF4全長序列和部分序列在原覈中的漏掃描錶達情況進行研究,SDS-PAGE和Western blot結果錶明VD1 ORF4全長序列和部分序列的原覈錶達產物均一,都隻有一條特異的目的蛋白帶,說明瞭VD1 ORF4序列在原覈錶達繫統中沒有漏掃描錶達的蛋白.
대가잠세소병독양병독(BmPLV-Z)VD1 ORF4이론상편마적안기산서렬진행Blast수색,결과표명기여DNA취합매B가족동원.통과PCR확증기DNA취합매동원구(1077 bp),장확증적목적DNA편단여원핵표체재체pET30a진행련접,통과불동농도적IPTG대포획pET30a-10877 bp중조질립적대장애희균진행유도,대유도산물진행SDS-PAGE전영,결과표명기취합매동원구획득료표체;Western blot분석진일보학증유도단백위대유6개조안산적융합단백.장할효획득적목적단백면역곤명소서제비기다항,이순화후적항혈청대 VD1 ORF4전장서렬화부분서렬재원핵중적루소묘표체정황진행연구,SDS-PAGE화Western blot결과표명VD1 ORF4전장서렬화부분서렬적원핵표체산물균일,도지유일조특이적목적단백대,설명료VD1 ORF4서렬재원핵표체계통중몰유루소묘표체적단백.
