特产研究
特產研究
특산연구
SPECIAL WILD ECONOMIC ANIMAL AND PLANT RESEARCH
2011年
2期
7-10
,共4页
刘东%邢秀梅%赵海平%褚文辉%鲁晓萍%王大涛%李春义
劉東%邢秀梅%趙海平%褚文輝%魯曉萍%王大濤%李春義
류동%형수매%조해평%저문휘%로효평%왕대도%리춘의
S100A4%PGEX-6P-1%BL21(DE3)%pLys S%蛋白表达
S100A4%PGEX-6P-1%BL21(DE3)%pLys S%蛋白錶達
S100A4%PGEX-6P-1%BL21(DE3)%pLys S%단백표체
我们的前期研究表明,鹿茸发生和再生都是依赖干细胞的过程.鹿茸的干细胞存在于鹿未来鹿茸发生区的骨膜中,即生茸骨膜.AP细胞表达特有的分子S100A4,推测为鹿茸发生的关键调节分子.进一步从分子水平阐述S100A4在鹿茸发生中的调节机制需要高质量S100A4的纯品.为了解决这一问题,我们针对已从梅花鹿AP细胞反转录出的S100A4基因序列,设计了含有EcoR I和BamH I酶切位点的上下游引物,并扩增出了目的片段.其后将S100A4基因片段和PGEX-6P-1载体酶切并进行了连接,转入Top10F'感受态细胞中,涂板筛选出了阳性克隆,进行了菌液PCR及双酶切鉴定,再将重组质粒转入了BL21(DE3)pLys S表达菌株进行了IPTG诱导表达.用聚丙烯酰胺凝胶电泳及western blot鉴定表明融合蛋白成功表达,随后对融合蛋白进行了纯化.本研究成功地实现了鹿本身特有的S100A4基因的体外表达.
我們的前期研究錶明,鹿茸髮生和再生都是依賴榦細胞的過程.鹿茸的榦細胞存在于鹿未來鹿茸髮生區的骨膜中,即生茸骨膜.AP細胞錶達特有的分子S100A4,推測為鹿茸髮生的關鍵調節分子.進一步從分子水平闡述S100A4在鹿茸髮生中的調節機製需要高質量S100A4的純品.為瞭解決這一問題,我們針對已從梅花鹿AP細胞反轉錄齣的S100A4基因序列,設計瞭含有EcoR I和BamH I酶切位點的上下遊引物,併擴增齣瞭目的片段.其後將S100A4基因片段和PGEX-6P-1載體酶切併進行瞭連接,轉入Top10F'感受態細胞中,塗闆篩選齣瞭暘性剋隆,進行瞭菌液PCR及雙酶切鑒定,再將重組質粒轉入瞭BL21(DE3)pLys S錶達菌株進行瞭IPTG誘導錶達.用聚丙烯酰胺凝膠電泳及western blot鑒定錶明融閤蛋白成功錶達,隨後對融閤蛋白進行瞭純化.本研究成功地實現瞭鹿本身特有的S100A4基因的體外錶達.
아문적전기연구표명,록용발생화재생도시의뢰간세포적과정.록용적간세포존재우록미래록용발생구적골막중,즉생용골막.AP세포표체특유적분자S100A4,추측위록용발생적관건조절분자.진일보종분자수평천술S100A4재록용발생중적조절궤제수요고질량S100A4적순품.위료해결저일문제,아문침대이종매화록AP세포반전록출적S100A4기인서렬,설계료함유EcoR I화BamH I매절위점적상하유인물,병확증출료목적편단.기후장S100A4기인편단화PGEX-6P-1재체매절병진행료련접,전입Top10F'감수태세포중,도판사선출료양성극륭,진행료균액PCR급쌍매절감정,재장중조질립전입료BL21(DE3)pLys S표체균주진행료IPTG유도표체.용취병희선알응효전영급western blot감정표명융합단백성공표체,수후대융합단백진행료순화.본연구성공지실현료록본신특유적S100A4기인적체외표체.
