中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2003年
4期
457-462
,共6页
孙兴会%李平%张宇清%谭理%王霞%侯敏%陈怡韵%朱运松
孫興會%李平%張宇清%譚理%王霞%侯敏%陳怡韻%硃運鬆
손흥회%리평%장우청%담리%왕하%후민%진이운%주운송
纤溶酶原激活剂抑制物-1%凝胶阻滞实验%融合基因%表达与纯化
纖溶酶原激活劑抑製物-1%凝膠阻滯實驗%融閤基因%錶達與純化
섬용매원격활제억제물-1%응효조체실험%융합기인%표체여순화
用PCR方法构建10个赖氨酸与纤溶酶原激活剂抑制物-1的融合基因Lys10-PAI-1,并克隆于pET28a(+)和pET32a(+)原核表达载体. 将重组表达质粒pET32-PAI和pET28-PAI转化大肠杆菌BL21(DE3). IPTG诱导后可获得分子量分别为63 kD和43 kD的目的蛋白,表达蛋白占菌体蛋白20%以上,大多数重组蛋白以不溶形式存在. 表达产物经变性、复性、超滤、透析和亲和层析等步骤,可以得到纯化的Trx*PAI-1和rPAI-1重组蛋白. Western 印迹结果表明,目的蛋白具有人PAI-1的抗原性. 凝胶阻滞实验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下,可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变. 研究结果表明,Trx*PAI-1和rPAI-1有希望成为受体介导基因转移的配体.
用PCR方法構建10箇賴氨痠與纖溶酶原激活劑抑製物-1的融閤基因Lys10-PAI-1,併剋隆于pET28a(+)和pET32a(+)原覈錶達載體. 將重組錶達質粒pET32-PAI和pET28-PAI轉化大腸桿菌BL21(DE3). IPTG誘導後可穫得分子量分彆為63 kD和43 kD的目的蛋白,錶達蛋白佔菌體蛋白20%以上,大多數重組蛋白以不溶形式存在. 錶達產物經變性、複性、超濾、透析和親和層析等步驟,可以得到純化的Trx*PAI-1和rPAI-1重組蛋白. Western 印跡結果錶明,目的蛋白具有人PAI-1的抗原性. 凝膠阻滯實驗髮現,純化的重組蛋白在一定條件下,可以與質粒結閤,使質粒的遷移率明顯改變. 研究結果錶明,Trx*PAI-1和rPAI-1有希望成為受體介導基因轉移的配體.
용PCR방법구건10개뢰안산여섬용매원격활제억제물-1적융합기인Lys10-PAI-1,병극륭우pET28a(+)화pET32a(+)원핵표체재체. 장중조표체질립pET32-PAI화pET28-PAI전화대장간균BL21(DE3). IPTG유도후가획득분자량분별위63 kD화43 kD적목적단백,표체단백점균체단백20%이상,대다수중조단백이불용형식존재. 표체산물경변성、복성、초려、투석화친화층석등보취,가이득도순화적Trx*PAI-1화rPAI-1중조단백. Western 인적결과표명,목적단백구유인PAI-1적항원성. 응효조체실험발현,순화적중조단백재일정조건하,가이여질립결합,사질립적천이솔명현개변. 연구결과표명,Trx*PAI-1화rPAI-1유희망성위수체개도기인전이적배체.
