CAJ | 학술논문

克隆并表达肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1黏附蛋白D-2区基因片段,进而对重组蛋白的抗原特异性进行鉴定.应用PCR技术获取目的基因片段,并构建含有目的基因片段的重组质粒,用重组质粒酶切图谱法、PCR扩增及核苷酸测序方法鉴定重组质粒.而后将其转入大肠杆菌BL21菌株,用IPTG诱导目的基因表达,用SDS-PAGE分析重组蛋白的相对分子量,免疫印迹实验鉴定其免疫反应性,并用ELISA实验测定重组蛋白抗原的特异性.结果重组质粒中的p1基因片段经测序后,与GenBank中p1基因核苷酸序列比较,其同源性为99.66%～100%;经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量约为 59 ku;免疫印迹实验和ELISA实验证实,Mp免疫血清和Mp感染患者血清都能与重组蛋白发生特异反应.研究中的含P1黏附因子D-2区基因的重组质粒已成功构建,其表达的重组蛋白具有特异的免疫反应性,初步ELISA实验证实,本研究获得的重组蛋白可用于临床标本检测.
극륭병표체폐염지원체(Mycoplasma pneumoniae,Mp)P1점부단백D-2구기인편단,진이대중조단백적항원특이성진행감정.응용PCR기술획취목적기인편단,병구건함유목적기인편단적중조질립,용중조질립매절도보법、PCR확증급핵감산측서방법감정중조질립.이후장기전입대장간균BL21균주,용IPTG유도목적기인표체,용SDS-PAGE분석중조단백적상대분자량,면역인적실험감정기면역반응성,병용ELISA실험측정중조단백항원적특이성.결과중조질립중적p1기인편단경측서후,여GenBank중p1기인핵감산서렬비교,기동원성위99.66%～100%;경SDS-PAGE분석,중조단백적상대분자량약위 59 ku;면역인적실험화ELISA실험증실,Mp면역혈청화Mp감염환자혈청도능여중조단백발생특이반응.연구중적함P1점부인자D-2구기인적중조질립이성공구건,기표체적중조단백구유특이적면역반응성,초보ELISA실험증실,본연구획득적중조단백가용우림상표본검측.