中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
7期
568-571
,共4页
姚海燕%韩跃武%张雪燕%谢俊秋
姚海燕%韓躍武%張雪燕%謝俊鞦
요해연%한약무%장설연%사준추
牛乳铁蛋白十肽%抗真菌肽%基因改造%基因克隆%表达
牛乳鐵蛋白十肽%抗真菌肽%基因改造%基因剋隆%錶達
우유철단백십태%항진균태%기인개조%기인극륭%표체
目的 克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因.方法 参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体.分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解.结果 获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29 000的目的 蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29 000的目的 蛋白条带消失.结论 已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础.
目的 剋隆併錶達牛乳鐵蛋白十肽及其突變體M1和M2基因.方法 參照大腸桿菌偏愛密碼子,分彆針對牛乳鐵蛋白十肽及其突變體M1和M2基因,設計併閤成兩箇具有相同黏性末耑的DNA片段,同時在其基因前後分彆加上天鼕酰胺和甘氨痠的密碼子,構成羥胺裂解位點,通過連接穫得其二拷貝基因同嚮串聯體.分彆將該串聯體剋隆至載體pUC18上,經雙酶切、PCR及測序鑒定後,構建重組錶達質粒,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達.錶達產物純化後,用凝血酶切割及羥胺裂解.結果 穫得瞭牛乳鐵蛋白十肽及其突變體M1和M2二拷貝基因,併在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達齣相對分子質量約29 000的目的 蛋白條帶,純化後的蛋白經凝血酶切割後,相對分子質量約29 000的目的 蛋白條帶消失.結論 已成功剋隆併錶達瞭牛乳鐵蛋白十肽及其突變體M1和M2基因,為基因工程抗真菌肽的製備奠定瞭基礎.
목적 극륭병표체우유철단백십태급기돌변체M1화M2기인.방법 삼조대장간균편애밀마자,분별침대우유철단백십태급기돌변체M1화M2기인,설계병합성량개구유상동점성말단적DNA편단,동시재기기인전후분별가상천동선알화감안산적밀마자,구성간알렬해위점,통과련접획득기이고패기인동향천련체.분별장해천련체극륭지재체pUC18상,경쌍매절、PCR급측서감정후,구건중조표체질립,전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체.표체산물순화후,용응혈매절할급간알렬해.결과 획득료우유철단백십태급기돌변체M1화M2이고패기인,병재대장간균BL21(DE3)중표체출상대분자질량약29 000적목적 단백조대,순화후적단백경응혈매절할후,상대분자질량약29 000적목적 단백조대소실.결론 이성공극륭병표체료우유철단백십태급기돌변체M1화M2기인,위기인공정항진균태적제비전정료기출.
