四川师范大学学报（自然科学版）
四川師範大學學報（自然科學版）
사천사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2011年
6期
884-888
,共5页
雍彬%司文杰%陶宗娅%严伟
雍彬%司文傑%陶宗婭%嚴偉
옹빈%사문걸%도종아%엄위
atp9基因%原核表达%序列分析%粗毛栓菌
atp9基因%原覈錶達%序列分析%粗毛栓菌
atp9기인%원핵표체%서렬분석%조모전균
ATP合酶是生物体内能量代谢的关键酶,参与多种氧化磷酸化和光合磷酸化反应.atp9基因是ATP合酶的重要组成部分,其编码了ATP合酶A亚基上第9亚单位,与呼吸作用和光合作用密切相关.本研究利用atP9基因在进化过程中高度保守的特点,据已知近缘真菌基因序列,设计并合成了一对引物,以粗毛栓菌mRNA反转录得到的cDNA第一链为模板,PCR扩增得到atp9基因完整序列,并连接于原核表达载体pET32a(+)上.测序与序列分析表明:该克隆片段全长222 bp,共编码73个氨基酸,翻译的蛋白质分子量是7.35 kDa.转化大肠杆菌后经IPTG诱导,可高效表达外源融合蛋白,分子量大小与预测结果一致.经过同源比对和进化树分析,该克隆基因编码的氨基酸序列与可可丛枝病菌(Crinipellis perniciosa)和瓣环栓菌(Trametes cingulata strain ATCC 26747)中相对应的氨基酸序列相似度最高.本实验为未来进一步研究粗毛栓菌atp9基因和其蛋白功能,阐明其调控和作用机制奠定了基础.
ATP閤酶是生物體內能量代謝的關鍵酶,參與多種氧化燐痠化和光閤燐痠化反應.atp9基因是ATP閤酶的重要組成部分,其編碼瞭ATP閤酶A亞基上第9亞單位,與呼吸作用和光閤作用密切相關.本研究利用atP9基因在進化過程中高度保守的特點,據已知近緣真菌基因序列,設計併閤成瞭一對引物,以粗毛栓菌mRNA反轉錄得到的cDNA第一鏈為模闆,PCR擴增得到atp9基因完整序列,併連接于原覈錶達載體pET32a(+)上.測序與序列分析錶明:該剋隆片段全長222 bp,共編碼73箇氨基痠,翻譯的蛋白質分子量是7.35 kDa.轉化大腸桿菌後經IPTG誘導,可高效錶達外源融閤蛋白,分子量大小與預測結果一緻.經過同源比對和進化樹分析,該剋隆基因編碼的氨基痠序列與可可叢枝病菌(Crinipellis perniciosa)和瓣環栓菌(Trametes cingulata strain ATCC 26747)中相對應的氨基痠序列相似度最高.本實驗為未來進一步研究粗毛栓菌atp9基因和其蛋白功能,闡明其調控和作用機製奠定瞭基礎.
ATP합매시생물체내능량대사적관건매,삼여다충양화린산화화광합린산화반응.atp9기인시ATP합매적중요조성부분,기편마료ATP합매A아기상제9아단위,여호흡작용화광합작용밀절상관.본연구이용atP9기인재진화과정중고도보수적특점,거이지근연진균기인서렬,설계병합성료일대인물,이조모전균mRNA반전록득도적cDNA제일련위모판,PCR확증득도atp9기인완정서렬,병련접우원핵표체재체pET32a(+)상.측서여서렬분석표명:해극륭편단전장222 bp,공편마73개안기산,번역적단백질분자량시7.35 kDa.전화대장간균후경IPTG유도,가고효표체외원융합단백,분자량대소여예측결과일치.경과동원비대화진화수분석,해극륭기인편마적안기산서렬여가가총지병균(Crinipellis perniciosa)화판배전균(Trametes cingulata strain ATCC 26747)중상대응적안기산서렬상사도최고.본실험위미래진일보연구조모전균atp9기인화기단백공능,천명기조공화작용궤제전정료기출.
