河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
1期
65-68
,共4页
殷全玉%郭夏丽%赵铭钦%王岩
慇全玉%郭夏麗%趙銘欽%王巖
은전옥%곽하려%조명흠%왕암
土壤微生物DNA%16S rDNA%V3区%PCR扩增%优化%热启动方式%退火温度
土壤微生物DNA%16S rDNA%V3區%PCR擴增%優化%熱啟動方式%退火溫度
토양미생물DNA%16S rDNA%V3구%PCR확증%우화%열계동방식%퇴화온도
为了优化以土壤微生物DNA为模板的PCR反应条件,采用E.Z.N.A.soil DNA kit试剂盒提取土壤微生物总DNA,对16S rDNA V3可变区的PCR反应体系和反应条件进行优化.主要从DNA模板用量、引物浓度、退火温度、热启动方式4个方面进行筛选试验,最后得出最适宜的土壤DNA扩增体系为:10.5 ng模板DNA、5μL 10×buffer、4 μL 2.5 mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5 μL,2.5 UTaq酶,加无菌ddH2O补足至50 μL; PCR循环程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸70 s,29个循环；72℃延伸5 min.试验结果表明:选择热启动方式和合适的退火温度是获得高质量PCR产物的关键.
為瞭優化以土壤微生物DNA為模闆的PCR反應條件,採用E.Z.N.A.soil DNA kit試劑盒提取土壤微生物總DNA,對16S rDNA V3可變區的PCR反應體繫和反應條件進行優化.主要從DNA模闆用量、引物濃度、退火溫度、熱啟動方式4箇方麵進行篩選試驗,最後得齣最適宜的土壤DNA擴增體繫為:10.5 ng模闆DNA、5μL 10×buffer、4 μL 2.5 mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5 μL,2.5 UTaq酶,加無菌ddH2O補足至50 μL; PCR循環程序為:94℃預變性5 min;94℃變性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸70 s,29箇循環；72℃延伸5 min.試驗結果錶明:選擇熱啟動方式和閤適的退火溫度是穫得高質量PCR產物的關鍵.
위료우화이토양미생물DNA위모판적PCR반응조건,채용E.Z.N.A.soil DNA kit시제합제취토양미생물총DNA,대16S rDNA V3가변구적PCR반응체계화반응조건진행우화.주요종DNA모판용량、인물농도、퇴화온도、열계동방식4개방면진행사선시험,최후득출최괄의적토양DNA확증체계위:10.5 ng모판DNA、5μL 10×buffer、4 μL 2.5 mmol/L dNTP、10μmol/L인물각1.5 μL,2.5 UTaq매,가무균ddH2O보족지50 μL; PCR순배정서위:94℃예변성5 min;94℃변성1 min,52℃퇴화1 min,72℃연신70 s,29개순배；72℃연신5 min.시험결과표명:선택열계동방식화합괄적퇴화온도시획득고질량PCR산물적관건.
