山东农业科学
山東農業科學
산동농업과학
SHANGDONG AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
9期
9-12,21
,共5页
姚永红%崔然%赵钦%王刚%肖一红%周恩民
姚永紅%崔然%趙欽%王剛%肖一紅%週恩民
요영홍%최연%조흠%왕강%초일홍%주은민
猪圆环病毒2型%ORF2蛋白%单克隆抗体
豬圓環病毒2型%ORF2蛋白%單剋隆抗體
저원배병독2형%ORF2단백%단극륭항체
为获得猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白单克隆抗体,将516 bp的ORF2基因片段克隆入pET -28a(+),转化人大肠杆菌,在IPTG的诱导下表达,用SDS - PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.将纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体,叠加ELISA方法检测两株单克隆抗体识别的抗原表位关系.SDS - PAGE和Western blot结果表明重组蛋白ORF2得到高效表达；筛选获得两株稳定分泌抗ORF2单克隆抗体的杂交瘤细胞系3H3和3F2,其分泌的单体均为IgG1亚型；且均具有较高的特异性和敏感性；叠加ELISA显示,两株单克隆抗体识别不同的抗原表位.本研究制备的单抗有较好的生物学特性,为PCV2的研究及快速准确诊断方法的建立提供了平台.
為穫得豬圓環病毒2型(PCV2)衣殼蛋白單剋隆抗體,將516 bp的ORF2基因片段剋隆入pET -28a(+),轉化人大腸桿菌,在IPTG的誘導下錶達,用SDS - PAGE和Western blot對錶達產物進行鑒定.將純化的重組蛋白免疫小鼠,製備單剋隆抗體,疊加ELISA方法檢測兩株單剋隆抗體識彆的抗原錶位關繫.SDS - PAGE和Western blot結果錶明重組蛋白ORF2得到高效錶達；篩選穫得兩株穩定分泌抗ORF2單剋隆抗體的雜交瘤細胞繫3H3和3F2,其分泌的單體均為IgG1亞型；且均具有較高的特異性和敏感性；疊加ELISA顯示,兩株單剋隆抗體識彆不同的抗原錶位.本研究製備的單抗有較好的生物學特性,為PCV2的研究及快速準確診斷方法的建立提供瞭平檯.
위획득저원배병독2형(PCV2)의각단백단극륭항체,장516 bp적ORF2기인편단극륭입pET -28a(+),전화인대장간균,재IPTG적유도하표체,용SDS - PAGE화Western blot대표체산물진행감정.장순화적중조단백면역소서,제비단극륭항체,첩가ELISA방법검측량주단극륭항체식별적항원표위관계.SDS - PAGE화Western blot결과표명중조단백ORF2득도고효표체；사선획득량주은정분비항ORF2단극륭항체적잡교류세포계3H3화3F2,기분비적단체균위IgG1아형；차균구유교고적특이성화민감성；첩가ELISA현시,량주단극륭항체식별불동적항원표위.본연구제비적단항유교호적생물학특성,위PCV2적연구급쾌속준학진단방법적건립제공료평태.
