CAJ | 학술논문

目的探讨环境毒素诱发蛋白水解应激在多巴胺能神经元变性死亡中的作用.方法 6-羟多巴(6-OHDA)、1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)、鱼藤酮作用于神经生长因子诱导的PC12细胞,MTT法检测各种药物的神经毒性作用,应用共聚焦免疫荧光双标染色观察药物处理后细胞内α-突触核蛋白及泛素化蛋白的表达及聚集.荧光分光光度计测量各组细胞蛋白酶体中各蛋白水解酶活性的变化.结果 3种神经诱变剂处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中6-OHDA 100 μmol/L、MPP+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L作用24 h使细胞活力分别下降52%、44%、40%(P＜0.01).共聚焦显微镜观察显示药物处理后细胞胞质内α-突触核蛋白及泛素表达上调,并形成蛋白颗粒物.酶活性测定提示MPP+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L处理使胰蛋白酶,糜蛋白酶及PgH水解酶活性明显下降(P＜0.05),而6-OHDA 100 μmol/L处理使细胞蛋白酶水解能力轻度降低,差异无统计学意义(P＞0.05),6-OHDA 200 μmol/L则诱导3种蛋白酶活性进一步下降,荧光指数分别为7.23±0.58,79.60±2.73和4.23±0.49(正常组为13.90±1.75,99.30±5.23和6.90±0.60,P＜0.01).结论神经诱变剂可导致多巴胺能神经元泛素蛋白酶体功能失调及α-突触核蛋白和泛素化蛋白的积聚,诱发蛋白水解应激异常状态.
목적 탐토배경독소유발단백수해응격재다파알능신경원변성사망중적작용.방법 6-간다파(6-OHDA)、1-갑기-4-분기필정리자(MPP+)、어등동작용우신경생장인자유도적PC12세포,MTT법검측각충약물적신경독성작용,응용공취초면역형광쌍표염색관찰약물처리후세포내α-돌촉핵단백급범소화단백적표체급취집.형광분광광도계측량각조세포단백매체중각단백수해매활성적변화.결과 3충신경유변제처리PC12세포후,세포활력정농도의뢰성하강,기중6-OHDA 100 μmol/L、MPP+75μmol/L、어등동20 nmol/L작용24 h사세포활력분별하강52%、44%、40%(P＜0.01).공취초현미경관찰현시약물처리후세포포질내α-돌촉핵단백급범소표체상조,병형성단백과립물.매활성측정제시MPP+75μmol/L、어등동20 nmol/L처리사이단백매,미단백매급PgH수해매활성명현하강(P＜0.05),이6-OHDA 100 μmol/L처리사세포단백매수해능력경도강저,차이무통계학의의(P＞0.05),6-OHDA 200 μmol/L칙유도3충단백매활성진일보하강,형광지수분별위7.23±0.58,79.60±2.73화4.23±0.49(정상조위13.90±1.75,99.30±5.23화6.90±0.60,P＜0.01).결론 신경유변제가도치다파알능신경원범소단백매체공능실조급α-돌촉핵단백화범소화단백적적취,유발단백수해응격이상상태.