中华病理学杂志
中華病理學雜誌
중화병이학잡지
Chinese Journal of Pathology
2004年
2期
146-150
,共5页
陈玲%方伟岗%衡万杰%由江峰
陳玲%方偉崗%衡萬傑%由江峰
진령%방위강%형만걸%유강봉
前列腺肿瘤%有丝分裂素激活蛋白激酶类%受体,嘌呤能P2%信号传导
前列腺腫瘤%有絲分裂素激活蛋白激酶類%受體,嘌呤能P2%信號傳導
전렬선종류%유사분렬소격활단백격매류%수체,표령능P2%신호전도
目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及p38通路在P2Y嘌呤受体活化对前列腺癌细胞产生的生物学效应中所起的作用.方法脂质体法将负显性MAPK激酶1(KA-MEK1)转染高转移性前列腺癌1E8细胞;Western印迹法检测ERK1/2活化水平;应用细胞计数、软琼脂集落形成实验、体外侵袭实验检测ERK1/2及p38通路在P2Y嘌呤受体活化对前列腺癌细胞生长、集落形成、体外侵袭效应中的作用;用流式细胞术检测ATP对凋亡的影响.结果转染KA-MEK1抑制了细胞的ERK1/2活性.常规培养6 d时,KA-MEK1细胞的活细胞数比对照组细胞减少了约71%;以100μmol/L ATP连续刺激6 d,KA-MEK1细胞的生长被进一步抑制17.2%;用10 μmol/L p38抑制剂SB203580预处理细胞,可以封闭ATP所诱导的额外生长抑制效应.说明持续P2Y受体活化可抑制前列腺癌细胞生长,ERK1/2和p38通路均在其中起作用.细胞凋亡并非ATP生长抑制作用的主要机制.在软琼脂集落形成实验中,KA-MEK1细胞比对照组细胞形成的集落小,而且数目减少了约75%;在抑制了ERK1/2活性后,以ATP预处理并不显著改变细胞的集落形成能力;进一步在抑制了ERK1/2活性的基础上,以SB203580处理细胞,对细胞集落形成能力也无明显影响.说明在影响癌细胞集落形成方面,主要是ERK1/2通路起作用.在体外侵袭实验中,KA-MEK1细胞的穿膜细胞数比对照组细胞减少了41%;以ATP刺激12 h可以促进前列腺癌细胞体外侵袭,其中KA-MEK1细胞的穿膜细胞增加率低于对照组细胞;进一步以SB203580处理细胞,可以抑制ATP诱导的促侵袭效应.说明ERK1/2和p38通路在ATP促侵袭效应中均发挥主要作用.结论P2Y嘌呤受体激活程度的差异可导致不同效应,并涉及不同信号传导通路.持续P2Y嘌呤受体活化抑制前列腺癌细胞生长,其中有ERK1/2及p38通路的参与;短暂P2Y嘌呤受体活化抑制前列腺癌细胞集落形成但促进前列腺癌细胞体外侵袭,在前者ERK1/2起重要的作用,后者有ERK1/2和p38通路的参与.
目的探討細胞外信號調節激酶(ERK1/2)及p38通路在P2Y嘌呤受體活化對前列腺癌細胞產生的生物學效應中所起的作用.方法脂質體法將負顯性MAPK激酶1(KA-MEK1)轉染高轉移性前列腺癌1E8細胞;Western印跡法檢測ERK1/2活化水平;應用細胞計數、軟瓊脂集落形成實驗、體外侵襲實驗檢測ERK1/2及p38通路在P2Y嘌呤受體活化對前列腺癌細胞生長、集落形成、體外侵襲效應中的作用;用流式細胞術檢測ATP對凋亡的影響.結果轉染KA-MEK1抑製瞭細胞的ERK1/2活性.常規培養6 d時,KA-MEK1細胞的活細胞數比對照組細胞減少瞭約71%;以100μmol/L ATP連續刺激6 d,KA-MEK1細胞的生長被進一步抑製17.2%;用10 μmol/L p38抑製劑SB203580預處理細胞,可以封閉ATP所誘導的額外生長抑製效應.說明持續P2Y受體活化可抑製前列腺癌細胞生長,ERK1/2和p38通路均在其中起作用.細胞凋亡併非ATP生長抑製作用的主要機製.在軟瓊脂集落形成實驗中,KA-MEK1細胞比對照組細胞形成的集落小,而且數目減少瞭約75%;在抑製瞭ERK1/2活性後,以ATP預處理併不顯著改變細胞的集落形成能力;進一步在抑製瞭ERK1/2活性的基礎上,以SB203580處理細胞,對細胞集落形成能力也無明顯影響.說明在影響癌細胞集落形成方麵,主要是ERK1/2通路起作用.在體外侵襲實驗中,KA-MEK1細胞的穿膜細胞數比對照組細胞減少瞭41%;以ATP刺激12 h可以促進前列腺癌細胞體外侵襲,其中KA-MEK1細胞的穿膜細胞增加率低于對照組細胞;進一步以SB203580處理細胞,可以抑製ATP誘導的促侵襲效應.說明ERK1/2和p38通路在ATP促侵襲效應中均髮揮主要作用.結論P2Y嘌呤受體激活程度的差異可導緻不同效應,併涉及不同信號傳導通路.持續P2Y嘌呤受體活化抑製前列腺癌細胞生長,其中有ERK1/2及p38通路的參與;短暫P2Y嘌呤受體活化抑製前列腺癌細胞集落形成但促進前列腺癌細胞體外侵襲,在前者ERK1/2起重要的作用,後者有ERK1/2和p38通路的參與.
목적탐토세포외신호조절격매(ERK1/2)급p38통로재P2Y표령수체활화대전렬선암세포산생적생물학효응중소기적작용.방법지질체법장부현성MAPK격매1(KA-MEK1)전염고전이성전렬선암1E8세포;Western인적법검측ERK1/2활화수평;응용세포계수、연경지집락형성실험、체외침습실험검측ERK1/2급p38통로재P2Y표령수체활화대전렬선암세포생장、집락형성、체외침습효응중적작용;용류식세포술검측ATP대조망적영향.결과전염KA-MEK1억제료세포적ERK1/2활성.상규배양6 d시,KA-MEK1세포적활세포수비대조조세포감소료약71%;이100μmol/L ATP련속자격6 d,KA-MEK1세포적생장피진일보억제17.2%;용10 μmol/L p38억제제SB203580예처리세포,가이봉폐ATP소유도적액외생장억제효응.설명지속P2Y수체활화가억제전렬선암세포생장,ERK1/2화p38통로균재기중기작용.세포조망병비ATP생장억제작용적주요궤제.재연경지집락형성실험중,KA-MEK1세포비대조조세포형성적집락소,이차수목감소료약75%;재억제료ERK1/2활성후,이ATP예처리병불현저개변세포적집락형성능력;진일보재억제료ERK1/2활성적기출상,이SB203580처리세포,대세포집락형성능력야무명현영향.설명재영향암세포집락형성방면,주요시ERK1/2통로기작용.재체외침습실험중,KA-MEK1세포적천막세포수비대조조세포감소료41%;이ATP자격12 h가이촉진전렬선암세포체외침습,기중KA-MEK1세포적천막세포증가솔저우대조조세포;진일보이SB203580처리세포,가이억제ATP유도적촉침습효응.설명ERK1/2화p38통로재ATP촉침습효응중균발휘주요작용.결론P2Y표령수체격활정도적차이가도치불동효응,병섭급불동신호전도통로.지속P2Y표령수체활화억제전렬선암세포생장,기중유ERK1/2급p38통로적삼여;단잠P2Y표령수체활화억제전렬선암세포집락형성단촉진전렬선암세포체외침습,재전자ERK1/2기중요적작용,후자유ERK1/2화p38통로적삼여.
