CAJ | 학술논문

背景与目的:先前研究发现采用反义技术下调cyclin B1基因表达水平,可产生抗肿瘤的作用,但其抗肿瘤机制有待进一步研究.本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法来探讨反义cyclin B1抗肿瘤作用的分子机制.方法:首先用含有小鼠cyclin B1反义全长cDNA的重组质粒转染小鼠CT26结肠癌细胞,经双向凝胶电泳(2-DE)分离转染组和未转染组的总蛋白,再用PDQuest图像分析识别2-DE胶图像,然后对差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)质谱分析,再经Mascot软件搜索数据库鉴定这些差异蛋白.最后根据被鉴定肽段的可信度,从这些蛋白质中选出肽段可信度最高的2个,用Western blot对其丰度差异进行了验证.结果:初步鉴定出7个差异表达蛋白,其中Axin2、CCTθ、DR5和HPCM27蛋白质在实验组上调,RFP17、mKIAA1195及LOC77035蛋白在实验组下调,而可信度最高的Axin2和DR5的蛋白质表达丰度差异为Western blot所证实.结论:多种蛋白质在反义cyclin B1后表达有明显差异,这些差异蛋白质参与细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及转录调控等多条信号通路,提示反义cyclin B1的抗肿瘤机制可能与上述蛋白质的作用有关.
배경여목적:선전연구발현채용반의기술하조cyclin B1기인표체수평,가산생항종류적작용,단기항종류궤제유대진일보연구.본연구지재이용비교단백질조학적방법래탐토반의cyclin B1항종류작용적분자궤제.방법:수선용함유소서cyclin B1반의전장cDNA적중조질립전염소서CT26결장암세포,경쌍향응효전영(2-DE)분리전염조화미전염조적총단백,재용PDQuest도상분석식별2-DE효도상,연후대차이표체적단백질점진행기질보조격광해흡전리비행시간(MALDI-TOF-MS)질보분석,재경Mascot연건수색수거고감정저사차이단백.최후근거피감정태단적가신도,종저사단백질중선출태단가신도최고적2개,용Western blot대기봉도차이진행료험증.결과:초보감정출7개차이표체단백,기중Axin2、CCTθ、DR5화HPCM27단백질재실험조상조,RFP17、mKIAA1195급LOC77035단백재실험조하조,이가신도최고적Axin2화DR5적단백질표체봉도차이위Western blot소증실.결론:다충단백질재반의cyclin B1후표체유명현차이,저사차이단백질삼여세포적증식、분화、천이、조망급전록조공등다조신호통로,제시반의cyclin B1적항종류궤제가능여상술단백질적작용유관.