中国现代医学杂志
中國現代醫學雜誌
중국현대의학잡지
CHINA JOURNAL OF MODERN MEDICINE
2007年
4期
398-401
,共4页
巨细胞病毒%基因PP150%原核表达%ELISA
巨細胞病毒%基因PP150%原覈錶達%ELISA
거세포병독%기인PP150%원핵표체%ELISA
目的 探讨人巨细胞病毒重组抗原PP150的原核表达及在酶联免疫吸附试验检测(ELISA)中的应用.方法 采用基因工程方法组建含有巨细胞病毒PP150蛋白强抗原决定簇基因的重组抗原克隆,进行诱导表达及纯化,在此基础上,以纯化的重组PP150蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),确定了判定标准,建立了检测HCMV IgM抗体的间接ELISA方法用此方法检测了266份血清样品,并与DSL公司ELISA试剂盒检测结果相比较.结果 重组表达质粒pMAL-P2-PP150可在E.coliDH5a中有效表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后,凝胶成像系统分析显示相对分子质量约为Mr 64000,约占菌体蛋白的10%.Western-blot检测,阳性识别率为80.0%(12/15).用此蛋白包被ELISA板,检测正常孕妇血清,诊断符合率为98.1%,敏感性达88.2%,特异性100%.应用该方法对正常人血清样品检测HCMV-IgM,阳性率为4.1%.结论 该重组蛋白具有良好的抗原性,可望替代HCMV感染检测中的全病毒ELISA试剂盒.
目的 探討人巨細胞病毒重組抗原PP150的原覈錶達及在酶聯免疫吸附試驗檢測(ELISA)中的應用.方法 採用基因工程方法組建含有巨細胞病毒PP150蛋白彊抗原決定簇基因的重組抗原剋隆,進行誘導錶達及純化,在此基礎上,以純化的重組PP150蛋白作為包被抗原,對各種條件進行優化(如抗原的包被,作用時間及底物的選擇),確定瞭判定標準,建立瞭檢測HCMV IgM抗體的間接ELISA方法用此方法檢測瞭266份血清樣品,併與DSL公司ELISA試劑盒檢測結果相比較.結果 重組錶達質粒pMAL-P2-PP150可在E.coliDH5a中有效錶達,錶達產物經SDS-PAGE電泳後,凝膠成像繫統分析顯示相對分子質量約為Mr 64000,約佔菌體蛋白的10%.Western-blot檢測,暘性識彆率為80.0%(12/15).用此蛋白包被ELISA闆,檢測正常孕婦血清,診斷符閤率為98.1%,敏感性達88.2%,特異性100%.應用該方法對正常人血清樣品檢測HCMV-IgM,暘性率為4.1%.結論 該重組蛋白具有良好的抗原性,可望替代HCMV感染檢測中的全病毒ELISA試劑盒.
목적 탐토인거세포병독중조항원PP150적원핵표체급재매련면역흡부시험검측(ELISA)중적응용.방법 채용기인공정방법조건함유거세포병독PP150단백강항원결정족기인적중조항원극륭,진행유도표체급순화,재차기출상,이순화적중조PP150단백작위포피항원,대각충조건진행우화(여항원적포피,작용시간급저물적선택),학정료판정표준,건립료검측HCMV IgM항체적간접ELISA방법용차방법검측료266빈혈청양품,병여DSL공사ELISA시제합검측결과상비교.결과 중조표체질립pMAL-P2-PP150가재E.coliDH5a중유효표체,표체산물경SDS-PAGE전영후,응효성상계통분석현시상대분자질량약위Mr 64000,약점균체단백적10%.Western-blot검측,양성식별솔위80.0%(12/15).용차단백포피ELISA판,검측정상잉부혈청,진단부합솔위98.1%,민감성체88.2%,특이성100%.응용해방법대정상인혈청양품검측HCMV-IgM,양성솔위4.1%.결론 해중조단백구유량호적항원성,가망체대HCMV감염검측중적전병독ELISA시제합.
