畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2008年
3期
376-379
,共4页
王颖%骆学农%郑亚东%马全英%丁军涛%景志忠%才学鹏
王穎%駱學農%鄭亞東%馬全英%丁軍濤%景誌忠%纔學鵬
왕영%락학농%정아동%마전영%정군도%경지충%재학붕
SLC10 基因%毕赤酵母%表达
SLC10 基因%畢赤酵母%錶達
SLC10 기인%필적효모%표체
SLC10 是以反式剪切引导序列为基础,通过 RT-PCR 从猪囊尾蚴中克隆到的一个未知基因.将猪囊尾蚴SLC10 基因从重组克隆载体 pGEM-SLC10 扩增并酶切后,与相应酶切处理的毕赤酵母分泌性表达载体 pPICgK 相连接,构建重组表达载体 pPIC9K-SLC10,转化大肠杆菌 JM109,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确.纯化的重组质粒 pPIC9K-SLC10 用内切酶 Sac Ⅰ线性化,电转化毕赤酵母,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合;采用G418抗性梯度法筛选多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达;通过SDS-PAGE和 Western-blot 分析表达产物,结果表明目的蛋白得到了表达,但不具有免疫反应性.
SLC10 是以反式剪切引導序列為基礎,通過 RT-PCR 從豬囊尾蚴中剋隆到的一箇未知基因.將豬囊尾蚴SLC10 基因從重組剋隆載體 pGEM-SLC10 擴增併酶切後,與相應酶切處理的畢赤酵母分泌性錶達載體 pPICgK 相連接,構建重組錶達載體 pPIC9K-SLC10,轉化大腸桿菌 JM109,經PCR、酶切和測序鑒定,基因序列完全正確.純化的重組質粒 pPIC9K-SLC10 用內切酶 Sac Ⅰ線性化,電轉化畢赤酵母,使重組錶達載體與酵母染色體髮生同源整閤;採用G418抗性梯度法篩選多拷貝重組菌株,用甲醇進行誘導錶達;通過SDS-PAGE和 Western-blot 分析錶達產物,結果錶明目的蛋白得到瞭錶達,但不具有免疫反應性.
SLC10 시이반식전절인도서렬위기출,통과 RT-PCR 종저낭미유중극륭도적일개미지기인.장저낭미유SLC10 기인종중조극륭재체 pGEM-SLC10 확증병매절후,여상응매절처리적필적효모분비성표체재체 pPICgK 상련접,구건중조표체재체 pPIC9K-SLC10,전화대장간균 JM109,경PCR、매절화측서감정,기인서렬완전정학.순화적중조질립 pPIC9K-SLC10 용내절매 Sac Ⅰ선성화,전전화필적효모,사중조표체재체여효모염색체발생동원정합;채용G418항성제도법사선다고패중조균주,용갑순진행유도표체;통과SDS-PAGE화 Western-blot 분석표체산물,결과표명목적단백득도료표체,단불구유면역반응성.
