华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2008年
4期
426-430
,共5页
章杰%闫媛%杨渝珍%杨业金
章傑%閆媛%楊渝珍%楊業金
장걸%염원%양투진%양업금
肿瘤坏死因子转换酶%小发夹结构%RNA%HeLa 细胞%细胞凋亡
腫瘤壞死因子轉換酶%小髮夾結構%RNA%HeLa 細胞%細胞凋亡
종류배사인자전환매%소발협결구%RNA%HeLa 세포%세포조망
目的 构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构 RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE 表达对 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计针对 TACE 基因的 4 个 shRNA 序列,构建真核表达载体 shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4.通过酶切和测序等方法进行鉴定.转染 HeLa 细胞后,用 Reahime PCR 的方法检测其对 HeLa 细胞 TACE 基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的 sTNF-α,间接反映干扰 TACE 的效果;用 MTT 法检测细胞增殖活性;用 DNA ladder 和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建和筛选出了针对 TACE 基因的 3 个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了 HeLa 细胞 TACE 基因的表达.ELISA 检测结果与 Reahime PCR实验结果相符.同时发现干扰 TACE 基因后,HeLa 细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05).实验组转染 shRNA1～3 后 72 h 可见特征性的基因组 DNA ladder 条带.结论 所构建的TACE shR-NA 真核表达载体能显著抑制 TACE 的表达.干扰 TACE 基因的表达可有效抑制 HeLa 细胞的增殖并诱导其凋亡.
目的 構建靶嚮腫瘤壞死因子轉換酶(TACE)的小髮夾結構 RNA(shRNA)的真覈錶達載體,觀察榦擾TA-CE 錶達對 HeLa 細胞增殖和凋亡的影響.方法 設計針對 TACE 基因的 4 箇 shRNA 序列,構建真覈錶達載體 shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4.通過酶切和測序等方法進行鑒定.轉染 HeLa 細胞後,用 Reahime PCR 的方法檢測其對 HeLa 細胞 TACE 基因錶達的影響;用ELISA檢測細胞分泌的 sTNF-α,間接反映榦擾 TACE 的效果;用 MTT 法檢測細胞增殖活性;用 DNA ladder 和流式細胞術檢測細胞凋亡.結果 成功構建和篩選齣瞭針對 TACE 基因的 3 箇有效的特異性真覈錶達載體,且均在不同程度上抑製瞭 HeLa 細胞 TACE 基因的錶達.ELISA 檢測結果與 Reahime PCR實驗結果相符.同時髮現榦擾 TACE 基因後,HeLa 細胞的生長受到抑製,凋亡率升高,與對照組相比差異有顯著性意義(P<0.05).實驗組轉染 shRNA1～3 後 72 h 可見特徵性的基因組 DNA ladder 條帶.結論 所構建的TACE shR-NA 真覈錶達載體能顯著抑製 TACE 的錶達.榦擾 TACE 基因的錶達可有效抑製 HeLa 細胞的增殖併誘導其凋亡.
목적 구건파향종류배사인자전환매(TACE)적소발협결구 RNA(shRNA)적진핵표체재체,관찰간우TA-CE 표체대 HeLa 세포증식화조망적영향.방법 설계침대 TACE 기인적 4 개 shRNA 서렬,구건진핵표체재체 shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4.통과매절화측서등방법진행감정.전염 HeLa 세포후,용 Reahime PCR 적방법검측기대 HeLa 세포 TACE 기인표체적영향;용ELISA검측세포분비적 sTNF-α,간접반영간우 TACE 적효과;용 MTT 법검측세포증식활성;용 DNA ladder 화류식세포술검측세포조망.결과 성공구건화사선출료침대 TACE 기인적 3 개유효적특이성진핵표체재체,차균재불동정도상억제료 HeLa 세포 TACE 기인적표체.ELISA 검측결과여 Reahime PCR실험결과상부.동시발현간우 TACE 기인후,HeLa 세포적생장수도억제,조망솔승고,여대조조상비차이유현저성의의(P<0.05).실험조전염 shRNA1～3 후 72 h 가견특정성적기인조 DNA ladder 조대.결론 소구건적TACE shR-NA 진핵표체재체능현저억제 TACE 적표체.간우 TACE 기인적표체가유효억제 HeLa 세포적증식병유도기조망.
