黑龙江畜牧兽医
黑龍江畜牧獸醫
흑룡강축목수의
HEILONGJIANG JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE AND VETERINARY MEDICINE
2009年
6期
21-23
,共3页
刘博奇%李广兴%王衡%尹杰超%李一经%王君伟%张赟硕%任晓峰
劉博奇%李廣興%王衡%尹傑超%李一經%王君偉%張赟碩%任曉峰
류박기%리엄흥%왕형%윤걸초%리일경%왕군위%장빈석%임효봉
猪氨肽酶N%蛋白表达%受体
豬氨肽酶N%蛋白錶達%受體
저안태매N%단백표체%수체
试验为了构建猪氨肽酶N (pAPN) 不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western-blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区.试验构建重组了质粒pET30a-pAPN1(106～669 nt)、pET30a-pAPN2(670～1 044 nt)、pET30a-pAPN3(1 045～1 773 nt)、pET30a-pAPN4(1 774～2 328 nt)、pET30a-pAPN5(2 329～2 889 nt)、pET30a-pAPN6(106～1 044 nt)、pET30a-pAPN7(1 774～2 889 nt);转化宿主菌BL21 (DE3) 细胞,IPTG诱导表达蛋白,包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化;用 Western-blot 、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区.结果表明:pET30a-pAPN2、pET30a-pAPN3、pET30a-pAPN6、pET30a-pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化.pET30a-pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应.经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36～153 aa、349～591 aa、592～963 aa内.
試驗為瞭構建豬氨肽酶N (pAPN) 不同基因片段大小的重組質粒併進行原覈錶達及純化,經Western-blot、ELISA方法初步鑒定豬氨肽酶N受體功能區.試驗構建重組瞭質粒pET30a-pAPN1(106～669 nt)、pET30a-pAPN2(670～1 044 nt)、pET30a-pAPN3(1 045～1 773 nt)、pET30a-pAPN4(1 774～2 328 nt)、pET30a-pAPN5(2 329～2 889 nt)、pET30a-pAPN6(106～1 044 nt)、pET30a-pAPN7(1 774～2 889 nt);轉化宿主菌BL21 (DE3) 細胞,IPTG誘導錶達蛋白,包涵體經SDS聚丙烯酰氨凝膠電泳迴收純化;用 Western-blot 、ELISA方法經抗pAPN多剋隆抗體初步篩選齣pAPN受體功能區.結果錶明:pET30a-pAPN2、pET30a-pAPN3、pET30a-pAPN6、pET30a-pAPN7蛋白均以包涵體形式錶達併純化.pET30a-pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能與抗pAPN多抗產生特異性反應.經抗pAPN多抗篩選初步鑒定齣其主要抗原功能區在36～153 aa、349～591 aa、592～963 aa內.
시험위료구건저안태매N (pAPN) 불동기인편단대소적중조질립병진행원핵표체급순화,경Western-blot、ELISA방법초보감정저안태매N수체공능구.시험구건중조료질립pET30a-pAPN1(106～669 nt)、pET30a-pAPN2(670～1 044 nt)、pET30a-pAPN3(1 045～1 773 nt)、pET30a-pAPN4(1 774～2 328 nt)、pET30a-pAPN5(2 329～2 889 nt)、pET30a-pAPN6(106～1 044 nt)、pET30a-pAPN7(1 774～2 889 nt);전화숙주균BL21 (DE3) 세포,IPTG유도표체단백,포함체경SDS취병희선안응효전영회수순화;용 Western-blot 、ELISA방법경항pAPN다극륭항체초보사선출pAPN수체공능구.결과표명:pET30a-pAPN2、pET30a-pAPN3、pET30a-pAPN6、pET30a-pAPN7단백균이포함체형식표체병순화.pET30a-pAPN3、pET30a-6、pET30a-7능여항pAPN다항산생특이성반응.경항pAPN다항사선초보감정출기주요항원공능구재36～153 aa、349～591 aa、592～963 aa내.
