中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2011年
3期
161-172
,共12页
富岩%韩国%富俞淞%杨小楠%邢静%于在林
富巖%韓國%富俞淞%楊小楠%邢靜%于在林
부암%한국%부유송%양소남%형정%우재림
血清白蛋白%粒细胞集落刺激因子%毕赤酵母%重组融合蛋白质类
血清白蛋白%粒細胞集落刺激因子%畢赤酵母%重組融閤蛋白質類
혈청백단백%립세포집락자격인자%필적효모%중조융합단백질류
目的 对符合制药要求的高纯度重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白原料药开展理化特性研究.方法 利用基因工程技术构建了可高效表达重组人血清白蛋白,粒细胞刺激因子融合蛋白(rHSA/GCSF)的毕赤酵母工程菌,rHSA/GCSF直接分泌到组分简单的无机盐培养基中,而后经特别建立的高效分离纯化工艺进行分离纯化.通过理化分析手段,首次获得rHSA/GCSF的多项理化特性指标和结果.结果 rHSA/GCSF 原料药的蛋白质纯度达到98%以上;肽质量指纹图谱匹配率为84%;N-端氨基酸序列前15个氨基酸与理论序列相符;质谱分子量测定结果为85305 D,与理论分子量85 215 D值相近:自由巯基含量为2.4;融合蛋白经圆二色光谱分析比对表明HSA和GCSF各自的空间构象未变:等电点(pⅠ)约为5.8;融合蛋白为非糖基化蛋白、紫外光谱呈现典型蛋白质光谱;原料药中的细菌内毒素、宿主蛋白质、外源性DNA、甲醇和甘油的残留量符合作为药物的要求.融合蛋白的免疫学鉴别为阳性:体外细胞学生物比活性测定结果值为1.5×107IU/mg,与单体rGCSF的等摩尔比没有显著差异.结论 研究获得的方法和结果可作为指导<注射用重组人血清白蛋白/粒细胞刺激因子融合蛋白>原料药的质量标准和制检规程的基础.
目的 對符閤製藥要求的高純度重組人血清白蛋白/粒細胞刺激因子融閤蛋白原料藥開展理化特性研究.方法 利用基因工程技術構建瞭可高效錶達重組人血清白蛋白,粒細胞刺激因子融閤蛋白(rHSA/GCSF)的畢赤酵母工程菌,rHSA/GCSF直接分泌到組分簡單的無機鹽培養基中,而後經特彆建立的高效分離純化工藝進行分離純化.通過理化分析手段,首次穫得rHSA/GCSF的多項理化特性指標和結果.結果 rHSA/GCSF 原料藥的蛋白質純度達到98%以上;肽質量指紋圖譜匹配率為84%;N-耑氨基痠序列前15箇氨基痠與理論序列相符;質譜分子量測定結果為85305 D,與理論分子量85 215 D值相近:自由巰基含量為2.4;融閤蛋白經圓二色光譜分析比對錶明HSA和GCSF各自的空間構象未變:等電點(pⅠ)約為5.8;融閤蛋白為非糖基化蛋白、紫外光譜呈現典型蛋白質光譜;原料藥中的細菌內毒素、宿主蛋白質、外源性DNA、甲醇和甘油的殘留量符閤作為藥物的要求.融閤蛋白的免疫學鑒彆為暘性:體外細胞學生物比活性測定結果值為1.5×107IU/mg,與單體rGCSF的等摩爾比沒有顯著差異.結論 研究穫得的方法和結果可作為指導<註射用重組人血清白蛋白/粒細胞刺激因子融閤蛋白>原料藥的質量標準和製檢規程的基礎.
목적 대부합제약요구적고순도중조인혈청백단백/립세포자격인자융합단백원료약개전이화특성연구.방법 이용기인공정기술구건료가고효표체중조인혈청백단백,립세포자격인자융합단백(rHSA/GCSF)적필적효모공정균,rHSA/GCSF직접분비도조분간단적무궤염배양기중,이후경특별건립적고효분리순화공예진행분리순화.통과이화분석수단,수차획득rHSA/GCSF적다항이화특성지표화결과.결과 rHSA/GCSF 원료약적단백질순도체도98%이상;태질량지문도보필배솔위84%;N-단안기산서렬전15개안기산여이론서렬상부;질보분자량측정결과위85305 D,여이론분자량85 215 D치상근:자유구기함량위2.4;융합단백경원이색광보분석비대표명HSA화GCSF각자적공간구상미변:등전점(pⅠ)약위5.8;융합단백위비당기화단백、자외광보정현전형단백질광보;원료약중적세균내독소、숙주단백질、외원성DNA、갑순화감유적잔류량부합작위약물적요구.융합단백적면역학감별위양성:체외세포학생물비활성측정결과치위1.5×107IU/mg,여단체rGCSF적등마이비몰유현저차이.결론 연구획득적방법화결과가작위지도<주사용중조인혈청백단백/립세포자격인자융합단백>원료약적질량표준화제검규정적기출.
