科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2012年
1期
30-33
,共4页
张彩勤%江鹰%赵勇%毛峰峰%赵善民%白冰%师长宏
張綵勤%江鷹%趙勇%毛峰峰%趙善民%白冰%師長宏
장채근%강응%조용%모봉봉%조선민%백빙%사장굉
结核分枝杆菌%Hsp16.3%单克隆抗体
結覈分枝桿菌%Hsp16.3%單剋隆抗體
결핵분지간균%Hsp16.3%단극륭항체
制备抗结核分枝杆菌Hsp16.3的单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.将含目的基因的表达载体pProEXHTb -Hsp16.3,通过E.coli DH5α诱导表达,获得含有6×His的Hsp16.3蛋白,采用Ni - NTA纯化试剂盒进行目的蛋白的纯化,并用透析方法进行蛋白复性.将复性的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株.将获得的Hsp16.3阳性杂交瘤细胞株分别利用间接ELISA法和Western blot方法进行效价、相对亲和力及特异性的测定.获得了三株Hsp16.3的单克隆抗体,分别命名为3H6F9、1D5E1和4H8G6,其效价分别为1∶1×10 7、1∶1×106和1∶1×106,相对亲和力分别为0.000 1 mg/mL、0.001 mg/mL和0.001 mg/mL,并且无交叉反应性.所获得的结核分枝杆菌Hsp16.3的单克隆抗体效价高、特异性强,为进一步研究Hsp16.3在结核分枝杆菌潜伏感染中的作用提供了有效的工具.
製備抗結覈分枝桿菌Hsp16.3的單剋隆抗體,併對其生物學特性進行鑒定.將含目的基因的錶達載體pProEXHTb -Hsp16.3,通過E.coli DH5α誘導錶達,穫得含有6×His的Hsp16.3蛋白,採用Ni - NTA純化試劑盒進行目的蛋白的純化,併用透析方法進行蛋白複性.將複性的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用雜交瘤技術進行細胞融閤,間接ELISA篩選暘性雜交瘤細胞株.將穫得的Hsp16.3暘性雜交瘤細胞株分彆利用間接ELISA法和Western blot方法進行效價、相對親和力及特異性的測定.穫得瞭三株Hsp16.3的單剋隆抗體,分彆命名為3H6F9、1D5E1和4H8G6,其效價分彆為1∶1×10 7、1∶1×106和1∶1×106,相對親和力分彆為0.000 1 mg/mL、0.001 mg/mL和0.001 mg/mL,併且無交扠反應性.所穫得的結覈分枝桿菌Hsp16.3的單剋隆抗體效價高、特異性彊,為進一步研究Hsp16.3在結覈分枝桿菌潛伏感染中的作用提供瞭有效的工具.
제비항결핵분지간균Hsp16.3적단극륭항체,병대기생물학특성진행감정.장함목적기인적표체재체pProEXHTb -Hsp16.3,통과E.coli DH5α유도표체,획득함유6×His적Hsp16.3단백,채용Ni - NTA순화시제합진행목적단백적순화,병용투석방법진행단백복성.장복성적단백면역BALB/c소서,이용잡교류기술진행세포융합,간접ELISA사선양성잡교류세포주.장획득적Hsp16.3양성잡교류세포주분별이용간접ELISA법화Western blot방법진행효개、상대친화력급특이성적측정.획득료삼주Hsp16.3적단극륭항체,분별명명위3H6F9、1D5E1화4H8G6,기효개분별위1∶1×10 7、1∶1×106화1∶1×106,상대친화력분별위0.000 1 mg/mL、0.001 mg/mL화0.001 mg/mL,병차무교차반응성.소획득적결핵분지간균Hsp16.3적단극륭항체효개고、특이성강,위진일보연구Hsp16.3재결핵분지간균잠복감염중적작용제공료유효적공구.
