中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2012年
3期
139-145
,共7页
罗猛%来大兴%弓磊%邱小明%祖玲玲%孙丽亚%吴志浩%周清华
囉猛%來大興%弓磊%邱小明%祖玲玲%孫麗亞%吳誌浩%週清華
라맹%래대흥%궁뢰%구소명%조령령%손려아%오지호%주청화
肺肿瘤%慢病毒%RNA%基因
肺腫瘤%慢病毒%RNA%基因
폐종류%만병독%RNA%기인
背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因.前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力.为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株.方法 将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株.逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-Hl基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变.结果 逆 转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低；shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1正常表达；侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强.结论 成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强.
揹景與目的 nm23-H1基因是重要的腫瘤轉移抑製基因.前期研究髮現利用化學閤成的小榦擾RNA(small interfering RNA,siRNA)抑製nm23-H1基因的錶達可明顯增彊肺癌細胞的侵襲力.為瞭進一步研究nm23-H1基因沉默後的分子生物學機製,本研究利用慢病毒介導的短髮夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因穩定沉默的肺癌細胞株.方法 將錶達特異性抑製nm23-H1基因shRNA的慢病毒轉染人大細胞肺癌細胞株NL9980和肺腺癌細胞株A549,通過嘌呤黴素篩選齣穩定轉染細胞株.逆轉錄PCR、定量PCR及Western blot法檢測nm23-Hl基因錶達,併通過shRNA牴抗的nm23-H1基因重組質粒轉染拯救實驗驗證,侵襲小室實驗檢測侵襲力改變.結果 逆 轉錄PCR、定量PCR和Western blot法檢測穩定轉染細胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平錶達均明顯降低；shRNA牴抗的nm23-H1基因重組質粒轉染拯救實驗重現nm23-H1正常錶達；侵襲小室實驗顯示NL9980-99和A549-99細胞侵襲力明顯增彊.結論 成功建立nm23-H1基因穩定沉默的人大細胞肺癌細胞株NL9980-99和人肺腺癌細胞株A549-99,nm23-H1基因沉默後使NL9980-99和A549-99細胞的侵襲力明顯增彊.
배경여목적 nm23-H1기인시중요적종류전이억제기인.전기연구발현이용화학합성적소간우RNA(small interfering RNA,siRNA)억제nm23-H1기인적표체가명현증강폐암세포적침습력.위료진일보연구nm23-H1기인침묵후적분자생물학궤제,본연구이용만병독개도적단발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)건립nm23-H1기인은정침묵적폐암세포주.방법 장표체특이성억제nm23-H1기인shRNA적만병독전염인대세포폐암세포주NL9980화폐선암세포주A549,통과표령매소사선출은정전염세포주.역전록PCR、정량PCR급Western blot법검측nm23-Hl기인표체,병통과shRNA저항적nm23-H1기인중조질립전염증구실험험증,침습소실실험검측침습력개변.결과 역 전록PCR、정량PCR화Western blot법검측은정전염세포주NL9980-99화A549-99중nm23-H1기인재mRNA화단백수평표체균명현강저；shRNA저항적nm23-H1기인중조질립전염증구실험중현nm23-H1정상표체；침습소실실험현시NL9980-99화A549-99세포침습력명현증강.결론 성공건립nm23-H1기인은정침묵적인대세포폐암세포주NL9980-99화인폐선암세포주A549-99,nm23-H1기인침묵후사NL9980-99화A549-99세포적침습력명현증강.
