甲型流感病毒H1N1HA 蛋白在果蝇S2细胞中的表达及免疫原性研究
갑형류감병독H1N1HA 단백재과승S2세포중적표체급면역원성연구
Expression of influenza virus A (H1N1) hemagglutinin (HA) in drosophila S2 cell lines and its immunogenicity analysis in BALB/c mice
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2012年 9期 875-879 ,共5页

    于虹%温晶%杨裔%俞建萍%佟双%郭彦%赵光宇%寇志华%周育森

    우홍%온정%양예%유건평%동쌍%곽언%조광우%구지화%주육삼

    甲型H1N1流感病毒%昆虫S2%细胞%HA 甲型H1N1流感病毒%昆蟲S2%細胞%HA
    갑형H1N1류감병독%곤충S2%세포%HA
    目的 在果蝇S2细胞表达甲型流感H1N1 HA并分析其免疫原性.方法 根据GenBank发表的甲型流感病毒(H1N1)HA基因序列,经过密码子优化,全基因合成编码HA的基因,并于其N端引入特定的空间折叠序列,定向连接至表达载体pMT/ Bip/ V5-His A,构建重组表达载体pMT-HA.酶切鉴定正确后,用脂质体转染法与辅助质粒pCoHygro 共转染果蝇S2细胞,潮霉素加压筛选稳定细胞系,在无血清培养基中以硫酸铜溶液诱导表达,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,经镍柱纯化后免疫小鼠,ELISA检测其诱导的特异性抗体水平.结果 获得了稳定表达HA的S2细胞株,目的 蛋白以分泌形式表达于上清,并形成三聚体,可以被H1N1 HA 抗体识别;免疫小鼠后可诱导机体产生抗HA特异性抗体.结论 获得了纯化的三聚体形式表达的HA蛋白,并具有较好的免疫原性,具有很好的疫苗应用前景.
    목적 재과승S2세포표체갑형류감H1N1 HA병분석기면역원성.방법 근거GenBank발표적갑형류감병독(H1N1)HA기인서렬,경과밀마자우화,전기인합성편마HA적기인,병우기N단인입특정적공간절첩서렬,정향련접지표체재체pMT/ Bip/ V5-His A,구건중조표체재체pMT-HA.매절감정정학후,용지질체전염법여보조질립pCoHygro 공전염과승S2세포,조매소가압사선은정세포계,재무혈청배양기중이류산동용액유도표체,SDS-PAGE전영급Western blot감정,경얼주순화후면역소서,ELISA검측기유도적특이성항체수평.결과 획득료은정표체HA적S2세포주,목적 단백이분비형식표체우상청,병형성삼취체,가이피H1N1 HA 항체식별;면역소서후가유도궤체산생항HA특이성항체.결론 획득료순화적삼취체형식표체적HA단백,병구유교호적면역원성,구유흔호적역묘응용전경.
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