CAJ | 학술논문

目的纯化卵巢上皮性癌单克隆抗体(单抗)183B2相关抗原,并对该抗原及其理化特性进行鉴定和分析.方法用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选出与单抗183B2阳性反应较强的卵巢上皮性癌腹水标本,继而用免疫亲和层析技术纯化得到相应抗原.纯化后的抗原分别经高碘酸钠、神经氨酸酶、去糖脂混合液及胰蛋白酶、链酶蛋白酶破坏糖链和肽链后,用间接ELISA方法检测其活性,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白印迹(western blot)法进行鉴定.再进一步用双向电泳结合western blot对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3细胞的相应抗原进行验证.结果纯化后的抗原经破坏糖链处理后活性不变,而经破坏肽链及加热处理后活性消失.SDS-PAGE显示,该抗原两个不同亚单位的相对分子质量分别为56 000和25 000,而前者能与单抗183B2反应.纯化后的抗原N端氨基酸测序后进行同源序列分析发现,此序列与人Ig重链N端的15个氨基酸相同.确定了双向电泳凝胶上3个目标点的位置,并初步确定该蛋白点的相对分子质量约为56 000,等电点为5.3～5.8. 结论卵巢上皮性癌单抗183B2相关抗原决定簇位于糖蛋白的肽链上,为Ig超家族成员,它可能是一种新的肿瘤相关抗原.
목적순화란소상피성암단극륭항체(단항)183B2상관항원,병대해항원급기이화특성진행감정화분석.방법용간접매련면역흡부시험(ELISA)방법사선출여단항183B2양성반응교강적란소상피성암복수표본,계이용면역친화층석기술순화득도상응항원.순화후적항원분별경고전산납、신경안산매、거당지혼합액급이단백매、련매단백매파배당련화태련후,용간접ELISA방법검측기활성,병용십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)급단백인적(western blot)법진행감정.재진일보용쌍향전영결합western blot대란소상피성암세포주SKOV3세포적상응항원진행험증.결과순화후적항원경파배당련처리후활성불변,이경파배태련급가열처리후활성소실.SDS-PAGE현시,해항원량개불동아단위적상대분자질량분별위56 000화25 000,이전자능여단항183B2반응.순화후적항원N단안기산측서후진행동원서렬분석발현,차서렬여인Ig중련N단적15개안기산상동.학정료쌍향전영응효상3개목표점적위치,병초보학정해단백점적상대분자질량약위56 000,등전점위5.3～5.8. 결론란소상피성암단항183B2상관항원결정족위우당단백적태련상,위Ig초가족성원,타가능시일충신적종류상관항원.