生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
3期
552-556
,共5页
HC%毕赤酵母%表达纯化
HC%畢赤酵母%錶達純化
HC%필적효모%표체순화
利用PCR技术从重组质粒pGEM-T/HC中扩增Hc cDNA片段,克隆到pPIC9k毕赤酵母表达载体中,获得重组质粒pPIC9k-HC,重组质粒线性化后电激转化入毕赤酵母GS115菌株中,重组子经G418筛选、PCR鉴定得到含外源基因的重组子.然后在含0.5%甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白,经SDS-PAGE检测发现表达蛋白质的相对分子量约为28kD,表达量约为121 mg/L,表达上清经超滤浓缩和阴离子交换层析初步纯化,所得纯化产物经Western-blot表明具有与兔抗HC血清特异性结合的能力;明胶电泳检测显示具有水解酶活性,为今后进行大规模的牛皮蝇蛆病的调查提供了一种生产大量廉价抗原的方法.
利用PCR技術從重組質粒pGEM-T/HC中擴增Hc cDNA片段,剋隆到pPIC9k畢赤酵母錶達載體中,穫得重組質粒pPIC9k-HC,重組質粒線性化後電激轉化入畢赤酵母GS115菌株中,重組子經G418篩選、PCR鑒定得到含外源基因的重組子.然後在含0.5%甲醇的培養基中誘導產生目的蛋白,經SDS-PAGE檢測髮現錶達蛋白質的相對分子量約為28kD,錶達量約為121 mg/L,錶達上清經超濾濃縮和陰離子交換層析初步純化,所得純化產物經Western-blot錶明具有與兔抗HC血清特異性結閤的能力;明膠電泳檢測顯示具有水解酶活性,為今後進行大規模的牛皮蠅蛆病的調查提供瞭一種生產大量廉價抗原的方法.
이용PCR기술종중조질립pGEM-T/HC중확증Hc cDNA편단,극륭도pPIC9k필적효모표체재체중,획득중조질립pPIC9k-HC,중조질립선성화후전격전화입필적효모GS115균주중,중조자경G418사선、PCR감정득도함외원기인적중조자.연후재함0.5%갑순적배양기중유도산생목적단백,경SDS-PAGE검측발현표체단백질적상대분자량약위28kD,표체량약위121 mg/L,표체상청경초려농축화음리자교환층석초보순화,소득순화산물경Western-blot표명구유여토항HC혈청특이성결합적능력;명효전영검측현시구유수해매활성,위금후진행대규모적우피승저병적조사제공료일충생산대량렴개항원적방법.
