CAJ | 학술논문

目的:了解丹参酮ⅡA对神经祖细胞系C17.2的保护作用,探讨其可能的作用机制.方法:本实验于2005年起在广州血液中心器官移植配型中心实验室进行.C17.2祖细胞系由澳大利亚新南威尔士大学解剖教研室David Walsh博士惠赠.将C17.2细胞以1×109 L-1的密度接种,用含10%胎牛血清lMDM,37℃、体积分数为0.05 CO2、饱和湿度的CO2培养箱培养,接近融合的C17.2细胞用含0.1 mmol/LEDTA的胰酶室温消化,按1:3的比例传代.C17.2细胞以5×107 L-1的密度接种于96孔板或25 cm2的培养瓶中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4 g/L AAPH(水溶性偶氮引发剂2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)二盐酸盐)无血清的lMDM培养基培养建立神经细胞凋亡模型.C17.2细胞以5×103/孔的密度接种于96孔板中,用含10%胎牛血清IMDM培养过夜后,加入含4 g/LAAPH无血清的IMDM培养基培养.对照组不加入丹参酮ⅡA,实验组分别加入0.02,0.05,0.1,0.2 mg/L丹参酮ⅡA培养8 h,噻唑蓝法检测细胞活性:细胞活性的相对值=(实验组吸光度值/对照组吸光度值)×100%,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:①AAPH处理8 h后,C17.2细胞被过氧化损害,大多数细胞失去正常的形态,细胞呈圆形,脱落.加入丹参酮ⅡA后,细胞形态基本保持正常,少数细胞呈圆形.②C17.2细胞在IMDM的培养液中,细胞数量是含4 g/L AAPH无血清的lMDM培养基条件下的2.5～3倍.浓度为0.02,0.05,0.1 mg/L的丹参酮ⅡA对C17.2细胞有保护作用,质量浓度大于0.2 mg/L丹参酮ⅡA对C17.2细胞保护作用降低.③AAPH作用前大部分C17.2细胞的线粒体完整,有少量的早期凋亡细胞和凋亡细胞,AAPH作用后凋亡细胞总数、凋亡细胞明显增加.丹参酮ⅡA处理组可以明显减少早期凋亡细胞.结论:在体外丹参酮ⅡA对神经细胞具有抗凋亡的作用,可以保护神经细胞.
목적:료해단삼동ⅡA대신경조세포계C17.2적보호작용,탐토기가능적작용궤제.방법:본실험우2005년기재엄주혈액중심기관이식배형중심실험실진행.C17.2조세포계유오대리아신남위이사대학해부교연실David Walsh박사혜증.장C17.2세포이1×109 L-1적밀도접충,용함10%태우혈청lMDM,37℃、체적분수위0.05 CO2、포화습도적CO2배양상배양,접근융합적C17.2세포용함0.1 mmol/LEDTA적이매실온소화,안1:3적비례전대.C17.2세포이5×107 L-1적밀도접충우96공판혹25 cm2적배양병중,용함10%태우혈청IMDM배양과야후,가입함4 g/L AAPH(수용성우담인발제2,2'-우담이(2-미기병완)이염산염)무혈청적lMDM배양기배양건립신경세포조망모형.C17.2세포이5×103/공적밀도접충우96공판중,용함10%태우혈청IMDM배양과야후,가입함4 g/LAAPH무혈청적IMDM배양기배양.대조조불가입단삼동ⅡA,실험조분별가입0.02,0.05,0.1,0.2 mg/L단삼동ⅡA배양8 h,새서람법검측세포활성:세포활성적상대치=(실험조흡광도치/대조조흡광도치)×100%,류식세포의검측세포조망.결과:①AAPH처리8 h후,C17.2세포피과양화손해,대다수세포실거정상적형태,세포정원형,탈락.가입단삼동ⅡA후,세포형태기본보지정상,소수세포정원형.②C17.2세포재IMDM적배양액중,세포수량시함4 g/L AAPH무혈청적lMDM배양기조건하적2.5～3배.농도위0.02,0.05,0.1 mg/L적단삼동ⅡA대C17.2세포유보호작용,질량농도대우0.2 mg/L단삼동ⅡA대C17.2세포보호작용강저.③AAPH작용전대부분C17.2세포적선립체완정,유소량적조기조망세포화조망세포,AAPH작용후조망세포총수、조망세포명현증가.단삼동ⅡA처리조가이명현감소조기조망세포.결론:재체외단삼동ⅡA대신경세포구유항조망적작용,가이보호신경세포.