华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2010年
4期
57-60
,共4页
李志伟%王志钢%湛奎%陈献威%杨军%李洁
李誌偉%王誌鋼%湛奎%陳獻威%楊軍%李潔
리지위%왕지강%담규%진헌위%양군%리길
细粒棘球蚴%Eg95%原核表达%蛋白纯化%生物活性
細粒棘毬蚴%Eg95%原覈錶達%蛋白純化%生物活性
세립극구유%Eg95%원핵표체%단백순화%생물활성
在克隆内蒙古羊源细粒棘球蚴疫苗候选基因Eg95的基础上,构建原核表达载体pET-Eg95并转化E.coli BL21(DE3),优化表达体系,获得Eg95纯化蛋白.将Eg95基因从克隆质粒pMD19-T-Eg95亚克隆到原核表达载体pET44a(+)上,构建原核表达载体pET-Eg95,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达,优化表达条件.纯化的 Eg95 融合蛋白经 SDS-PAGE和Western Blot鉴定其正确性和免疫学活性.原核表达载体pET-Eg95在大肠杆菌中高效表达,优化的原核表达条件为:当菌液OD600值为0.6时,加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG,37℃,振荡培养5 h.纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定为目的蛋白并具有生物学活性.原核表达载体pET-Eg95构建正确并可高效表达可溶性Nus-Eg95融合蛋白,可作为特异性抗原应用于免疫印迹法检测血清抗体.
在剋隆內矇古羊源細粒棘毬蚴疫苗候選基因Eg95的基礎上,構建原覈錶達載體pET-Eg95併轉化E.coli BL21(DE3),優化錶達體繫,穫得Eg95純化蛋白.將Eg95基因從剋隆質粒pMD19-T-Eg95亞剋隆到原覈錶達載體pET44a(+)上,構建原覈錶達載體pET-Eg95,轉化E.coli BL21(DE3)誘導錶達,優化錶達條件.純化的 Eg95 融閤蛋白經 SDS-PAGE和Western Blot鑒定其正確性和免疫學活性.原覈錶達載體pET-Eg95在大腸桿菌中高效錶達,優化的原覈錶達條件為:噹菌液OD600值為0.6時,加入終濃度為0.1 mmol/L的IPTG,37℃,振盪培養5 h.純化後的蛋白經SDS-PAGE和Western blot鑒定為目的蛋白併具有生物學活性.原覈錶達載體pET-Eg95構建正確併可高效錶達可溶性Nus-Eg95融閤蛋白,可作為特異性抗原應用于免疫印跡法檢測血清抗體.
재극륭내몽고양원세립극구유역묘후선기인Eg95적기출상,구건원핵표체재체pET-Eg95병전화E.coli BL21(DE3),우화표체체계,획득Eg95순화단백.장Eg95기인종극륭질립pMD19-T-Eg95아극륭도원핵표체재체pET44a(+)상,구건원핵표체재체pET-Eg95,전화E.coli BL21(DE3)유도표체,우화표체조건.순화적 Eg95 융합단백경 SDS-PAGE화Western Blot감정기정학성화면역학활성.원핵표체재체pET-Eg95재대장간균중고효표체,우화적원핵표체조건위:당균액OD600치위0.6시,가입종농도위0.1 mmol/L적IPTG,37℃,진탕배양5 h.순화후적단백경SDS-PAGE화Western blot감정위목적단백병구유생물학활성.원핵표체재체pET-Eg95구건정학병가고효표체가용성Nus-Eg95융합단백,가작위특이성항원응용우면역인적법검측혈청항체.
