首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2011年
2期
254-258
,共5页
刘晓娟%张力青%李健%翟方丽%李慎涛
劉曉娟%張力青%李健%翟方麗%李慎濤
류효연%장력청%리건%적방려%리신도
γ-突触核蛋白%融合蛋白%原核表达%蛋白纯化
γ-突觸覈蛋白%融閤蛋白%原覈錶達%蛋白純化
γ-돌촉핵단백%융합단백%원핵표체%단백순화
目的 对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化.方法 根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白.结果 γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白.经过纯化,得到纯度高达98%的γ-突触核蛋白.结论 成功地在大肠杆菌中高效表达了γ-突触核蛋白,并建立了纯化工艺,得到高纯度的重组蛋白,为进一步研究γ-突触核蛋白的晶体结构、生物学活性及功能,探讨其在肿瘤中的发病机制奠定了基础.
目的 對γ-突觸覈蛋白(synuclein)基因進行剋隆,併對其錶達及純化條件進行優化.方法 根據GenBank中γ-突觸覈蛋白的基因序列,設計PCR引物,從人腦cDNA文庫中擴增γ-突觸覈蛋白的編碼DNA序列,將其剋隆至pGEX-6p-1載體中,構建重組質粒,將測序正確的重組質粒轉化入大腸桿菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導錶達;對培養溫度、IPTG的用量、誘導時間等條件進行瞭優化;用SDS-PAGE和質譜分析錶達的目標蛋白;用親和層析、離子交換層析、凝膠過濾純化目標蛋白.結果 γ-突觸覈蛋白在大腸桿菌中高效、可溶性錶達,經質譜鑒定及SDS-PAGE分析,錶達產物為γ-突觸覈蛋白.經過純化,得到純度高達98%的γ-突觸覈蛋白.結論 成功地在大腸桿菌中高效錶達瞭γ-突觸覈蛋白,併建立瞭純化工藝,得到高純度的重組蛋白,為進一步研究γ-突觸覈蛋白的晶體結構、生物學活性及功能,探討其在腫瘤中的髮病機製奠定瞭基礎.
목적 대γ-돌촉핵단백(synuclein)기인진행극륭,병대기표체급순화조건진행우화.방법 근거GenBank중γ-돌촉핵단백적기인서렬,설계PCR인물,종인뇌cDNA문고중확증γ-돌촉핵단백적편마DNA서렬,장기극륭지pGEX-6p-1재체중,구건중조질립,장측서정학적중조질립전화입대장간균BL21(DE3)중,용IPTG유도표체;대배양온도、IPTG적용량、유도시간등조건진행료우화;용SDS-PAGE화질보분석표체적목표단백;용친화층석、리자교환층석、응효과려순화목표단백.결과 γ-돌촉핵단백재대장간균중고효、가용성표체,경질보감정급SDS-PAGE분석,표체산물위γ-돌촉핵단백.경과순화,득도순도고체98%적γ-돌촉핵단백.결론 성공지재대장간균중고효표체료γ-돌촉핵단백,병건립료순화공예,득도고순도적중조단백,위진일보연구γ-돌촉핵단백적정체결구、생물학활성급공능,탐토기재종류중적발병궤제전정료기출.
