中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2011年
3期
721-724
,共4页
李田兰%赵春亭%张忠广%刘竹珍%刘世海%孟冬梅%张元峰
李田蘭%趙春亭%張忠廣%劉竹珍%劉世海%孟鼕梅%張元峰
리전란%조춘정%장충엄%류죽진%류세해%맹동매%장원봉
同源盒基因%HoxB4%重组质粒%真核表达载体
同源盒基因%HoxB4%重組質粒%真覈錶達載體
동원합기인%HoxB4%중조질립%진핵표체재체
本研究旨在构建人同源盒基因HoxB4真核表达载体并进行鉴定,为进一步研究HoxB4的作用提供物质基础.采用RT-PCR的方法从健康产妇脐血单个核细胞中扩增出该基因,并将HoxB4的PCR产物用EcoRI和BamHI双酶切后连接到用EcoRI和BamHI双酶切的带有EGFP编码序列和内部核糖体转入位点(IRES)的真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒在大肠杆菌DH5α内扩增后,对其进行双酶切及测序鉴定以证实载体构建成功.结果表明,双酶切和质粒测序结果证明HoxB4基因正确的连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,开放阅读框架正确,pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体构建成功.结论:利用PCR,DNA重组等分子生物学技术,成功构建了pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体,为探讨HoxB4基因在造血干细胞的增殖和分化的调控功能提供了实验基础.
本研究旨在構建人同源盒基因HoxB4真覈錶達載體併進行鑒定,為進一步研究HoxB4的作用提供物質基礎.採用RT-PCR的方法從健康產婦臍血單箇覈細胞中擴增齣該基因,併將HoxB4的PCR產物用EcoRI和BamHI雙酶切後連接到用EcoRI和BamHI雙酶切的帶有EGFP編碼序列和內部覈糖體轉入位點(IRES)的真覈錶達載體pIRES2-EGFP中,重組質粒在大腸桿菌DH5α內擴增後,對其進行雙酶切及測序鑒定以證實載體構建成功.結果錶明,雙酶切和質粒測序結果證明HoxB4基因正確的連接到真覈錶達載體pIRES2-EGFP中,開放閱讀框架正確,pIRES2-EGFP/HoxB4真覈錶達載體構建成功.結論:利用PCR,DNA重組等分子生物學技術,成功構建瞭pIRES2-EGFP/HoxB4真覈錶達載體,為探討HoxB4基因在造血榦細胞的增殖和分化的調控功能提供瞭實驗基礎.
본연구지재구건인동원합기인HoxB4진핵표체재체병진행감정,위진일보연구HoxB4적작용제공물질기출.채용RT-PCR적방법종건강산부제혈단개핵세포중확증출해기인,병장HoxB4적PCR산물용EcoRI화BamHI쌍매절후련접도용EcoRI화BamHI쌍매절적대유EGFP편마서렬화내부핵당체전입위점(IRES)적진핵표체재체pIRES2-EGFP중,중조질립재대장간균DH5α내확증후,대기진행쌍매절급측서감정이증실재체구건성공.결과표명,쌍매절화질립측서결과증명HoxB4기인정학적련접도진핵표체재체pIRES2-EGFP중,개방열독광가정학,pIRES2-EGFP/HoxB4진핵표체재체구건성공.결론:이용PCR,DNA중조등분자생물학기술,성공구건료pIRES2-EGFP/HoxB4진핵표체재체,위탐토HoxB4기인재조혈간세포적증식화분화적조공공능제공료실험기출.
