畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2000年
4期
296-300
,共5页
高运东%仲跻峰%王文英%王庆国%马世援%冯敏燕
高運東%仲躋峰%王文英%王慶國%馬世援%馮敏燕
고운동%중제봉%왕문영%왕경국%마세원%풍민연
bGRF类似物基因%化学合成%克隆%表达
bGRF類似物基因%化學閤成%剋隆%錶達
bGRF유사물기인%화학합성%극륭%표체
本研究以近期报道的高生物学活性、高代谢稳定性的牛生长激素释放因子类似物(Ile2,Ala15,Leu27)bGRF(1-29)-NH2的氨基酸序列为模板,选用大肠杆菌高效表达所偏爱的密码子设计出该基因的全序列.采用化学合成法合成两个3′末端有19碱基互补的80碱基的寡核苷酸片段.并互为模板和引物,通过酶促延伸合成完整的bGRF类似物基因,克隆于pT7 Blue T-Vector中,通过蓝/白筛选和酶切分析确定了阳性克隆.然后将目的基因从pT7 Blue T-Vector克隆于pUC18载体中,以便多拷贝基因的制备.通过测序证明我们获得了目的克隆.将目的基因首尾串联,制备得到的16拷贝基因在温控启动子PRPL调控下于大肠杆菌中获得表达.
本研究以近期報道的高生物學活性、高代謝穩定性的牛生長激素釋放因子類似物(Ile2,Ala15,Leu27)bGRF(1-29)-NH2的氨基痠序列為模闆,選用大腸桿菌高效錶達所偏愛的密碼子設計齣該基因的全序列.採用化學閤成法閤成兩箇3′末耑有19堿基互補的80堿基的寡覈苷痠片段.併互為模闆和引物,通過酶促延伸閤成完整的bGRF類似物基因,剋隆于pT7 Blue T-Vector中,通過藍/白篩選和酶切分析確定瞭暘性剋隆.然後將目的基因從pT7 Blue T-Vector剋隆于pUC18載體中,以便多拷貝基因的製備.通過測序證明我們穫得瞭目的剋隆.將目的基因首尾串聯,製備得到的16拷貝基因在溫控啟動子PRPL調控下于大腸桿菌中穫得錶達.
본연구이근기보도적고생물학활성、고대사은정성적우생장격소석방인자유사물(Ile2,Ala15,Leu27)bGRF(1-29)-NH2적안기산서렬위모판,선용대장간균고효표체소편애적밀마자설계출해기인적전서렬.채용화학합성법합성량개3′말단유19감기호보적80감기적과핵감산편단.병호위모판화인물,통과매촉연신합성완정적bGRF유사물기인,극륭우pT7 Blue T-Vector중,통과람/백사선화매절분석학정료양성극륭.연후장목적기인종pT7 Blue T-Vector극륭우pUC18재체중,이편다고패기인적제비.통과측서증명아문획득료목적극륭.장목적기인수미천련,제비득도적16고패기인재온공계동자PRPL조공하우대장간균중획득표체.
