生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
4期
490-495
,共6页
陈姗%何凤田%董燕麟%李蓉芬%高会广%陈敏%彭家和
陳姍%何鳳田%董燕麟%李蓉芬%高會廣%陳敏%彭傢和
진산%하봉전%동연린%리용분%고회엄%진민%팽가화
hβD-3%肽抗生素%克隆%融合表达
hβD-3%肽抗生素%剋隆%融閤錶達
hβD-3%태항생소%극륭%융합표체
近年来由于抗生素的不规范使用等多种原因,细菌耐药问题日益严重,人们正努力从各个方面来解决,其中机体天然产生的肽抗生素(peptide antibiotics)由于其对耐药菌的强大抗菌作用而受到人们的关注.肽抗生素是一种阳离子小分子多肽,在天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用.防御素(defensin)是肽抗生素中较为重要的一种,主要来源于皮肤、呼吸道等的上皮组织,是正常机体抵抗外界病原微生物入侵的重要防线.人β-防御素3(human beta-defensin 3,hβD-3)参与人体免疫屏障,并因具有广谱抗菌和抗菌活性不被盐离子浓度抑制等特点而具特别的研究开发价值.提取中国人扁桃体组织总RNA,以RT-PCR技术扩增编码hβD-3成熟肽的cDNA并构建于原核表达载体pQE-80L,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析.重组蛋白表达量达到细菌表达总量的40%.重组蛋白自表达菌包涵体中提取后,经亲和层析法纯化目的蛋白达到电泳纯,经多步透析法复性,在体外抗菌实验中表现出了对金黄色葡萄球菌、多重耐药金黄色葡萄球菌等的抗菌活性,为进一步的研究和开发奠定了基础.
近年來由于抗生素的不規範使用等多種原因,細菌耐藥問題日益嚴重,人們正努力從各箇方麵來解決,其中機體天然產生的肽抗生素(peptide antibiotics)由于其對耐藥菌的彊大抗菌作用而受到人們的關註.肽抗生素是一種暘離子小分子多肽,在天然免疫和穫得性免疫中都髮揮著重要作用.防禦素(defensin)是肽抗生素中較為重要的一種,主要來源于皮膚、呼吸道等的上皮組織,是正常機體牴抗外界病原微生物入侵的重要防線.人β-防禦素3(human beta-defensin 3,hβD-3)參與人體免疫屏障,併因具有廣譜抗菌和抗菌活性不被鹽離子濃度抑製等特點而具特彆的研究開髮價值.提取中國人扁桃體組織總RNA,以RT-PCR技術擴增編碼hβD-3成熟肽的cDNA併構建于原覈錶達載體pQE-80L,IPTG誘導錶達後利用SDS-PAGE、免疫印記等方法對重組蛋白進行分析.重組蛋白錶達量達到細菌錶達總量的40%.重組蛋白自錶達菌包涵體中提取後,經親和層析法純化目的蛋白達到電泳純,經多步透析法複性,在體外抗菌實驗中錶現齣瞭對金黃色葡萄毬菌、多重耐藥金黃色葡萄毬菌等的抗菌活性,為進一步的研究和開髮奠定瞭基礎.
근년래유우항생소적불규범사용등다충원인,세균내약문제일익엄중,인문정노력종각개방면래해결,기중궤체천연산생적태항생소(peptide antibiotics)유우기대내약균적강대항균작용이수도인문적관주.태항생소시일충양리자소분자다태,재천연면역화획득성면역중도발휘착중요작용.방어소(defensin)시태항생소중교위중요적일충,주요래원우피부、호흡도등적상피조직,시정상궤체저항외계병원미생물입침적중요방선.인β-방어소3(human beta-defensin 3,hβD-3)삼여인체면역병장,병인구유엄보항균화항균활성불피염리자농도억제등특점이구특별적연구개발개치.제취중국인편도체조직총RNA,이RT-PCR기술확증편마hβD-3성숙태적cDNA병구건우원핵표체재체pQE-80L,IPTG유도표체후이용SDS-PAGE、면역인기등방법대중조단백진행분석.중조단백표체량체도세균표체총량적40%.중조단백자표체균포함체중제취후,경친화층석법순화목적단백체도전영순,경다보투석법복성,재체외항균실험중표현출료대금황색포도구균、다중내약금황색포도구균등적항균활성,위진일보적연구화개발전정료기출.
