中国药科大学学报
中國藥科大學學報
중국약과대학학보
JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
2005年
4期
363-367
,共5页
孙石静%张新元%孙雄华%廖建民%沈子龙
孫石靜%張新元%孫雄華%廖建民%瀋子龍
손석정%장신원%손웅화%료건민%침자룡
瑞替普酶%融合蛋白%诱导表达%优化%复性
瑞替普酶%融閤蛋白%誘導錶達%優化%複性
서체보매%융합단백%유도표체%우화%복성
目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率.方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响.运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化和复性.结果与结论:LB培养基pH值为6,Amp浓度为100μg/mL,乳糖浓度为5 mmol/L的条件下39℃诱导4 h可获得高效表达的r-PA融合蛋白,其表达量占全菌蛋白的70%,其产物主要以包涵体形式存在.融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化复性,其复性率可达10%,比活为55.7 U/μL.
目的:為優化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大腸桿菌中的高效融閤錶達的條件,併提高其複性率.方法:通過改變誘導時間和溫度、誘導劑濃度、培養基pH值及氨芐青黴素(Amp)濃度等條件,利用SDS-PAGE分析以上條件的改變對錶達產物產量的影響.運用金屬螯閤層析對融閤蛋白進行純化和複性.結果與結論:LB培養基pH值為6,Amp濃度為100μg/mL,乳糖濃度為5 mmol/L的條件下39℃誘導4 h可穫得高效錶達的r-PA融閤蛋白,其錶達量佔全菌蛋白的70%,其產物主要以包涵體形式存在.融閤蛋白運用金屬螯閤層析一步純化複性,其複性率可達10%,比活為55.7 U/μL.
목적:위우화서체보매(reteplase,r-PA)재대장간균중적고효융합표체적조건,병제고기복성솔.방법:통과개변유도시간화온도、유도제농도、배양기pH치급안변청매소(Amp)농도등조건,이용SDS-PAGE분석이상조건적개변대표체산물산량적영향.운용금속오합층석대융합단백진행순화화복성.결과여결론:LB배양기pH치위6,Amp농도위100μg/mL,유당농도위5 mmol/L적조건하39℃유도4 h가획득고효표체적r-PA융합단백,기표체량점전균단백적70%,기산물주요이포함체형식존재.융합단백운용금속오합층석일보순화복성,기복성솔가체10%,비활위55.7 U/μL.
