福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
6期
550-552,555
,共4页
张文敏%姜桔红%张萌%文剑明
張文敏%薑桔紅%張萌%文劍明
장문민%강길홍%장맹%문검명
热休克蛋白70%NY-ESO-1%融合基因%原核表达
熱休剋蛋白70%NY-ESO-1%融閤基因%原覈錶達
열휴극단백70%NY-ESO-1%융합기인%원핵표체
目的 构建热休克蛋白(HSP)70和肿瘤睾丸抗原NY-ESO-1融合基因,并在大肠杆菌中诱导表达. 方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从人肝癌细胞株HepG2扩增HSP70基因,测序后插入pGEX-ESO1质粒中,构建NY-ESO-1与HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-ESO1-HSP70,IPTG诱导含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)表达目的蛋白,Western blot 鉴定蛋白的特异性. 结果 扩增得到长度为1 917 bp的人HSP70全长基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致;获得pGEX-ESO1-HSP70融合基因原核表达质粒,经IPTG诱导,在BL21(DE3)中表达分子量约106 kD的融合蛋白(包括GST 26 kD,NY-ESO1 10 kD,HSP70 70 kD),Western blot检测该蛋白可与HSP70特异性结合. 结论 成功构建pGEX-ESO1-HSP70重组表达质粒,并获得高效表达的ESO1-HSP70融合蛋白,为HSP70-多肽疫苗在肿瘤免疫治疗中的作用奠定基础.
目的 構建熱休剋蛋白(HSP)70和腫瘤睪汍抗原NY-ESO-1融閤基因,併在大腸桿菌中誘導錶達. 方法 應用逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)技術,從人肝癌細胞株HepG2擴增HSP70基因,測序後插入pGEX-ESO1質粒中,構建NY-ESO-1與HSP70的N耑融閤基因原覈錶達質粒pGEX-ESO1-HSP70,IPTG誘導含有該質粒的大腸桿菌BL21(DE3)錶達目的蛋白,Western blot 鑒定蛋白的特異性. 結果 擴增得到長度為1 917 bp的人HSP70全長基因,測序結果錶明與GenBank公佈的序列一緻;穫得pGEX-ESO1-HSP70融閤基因原覈錶達質粒,經IPTG誘導,在BL21(DE3)中錶達分子量約106 kD的融閤蛋白(包括GST 26 kD,NY-ESO1 10 kD,HSP70 70 kD),Western blot檢測該蛋白可與HSP70特異性結閤. 結論 成功構建pGEX-ESO1-HSP70重組錶達質粒,併穫得高效錶達的ESO1-HSP70融閤蛋白,為HSP70-多肽疫苗在腫瘤免疫治療中的作用奠定基礎.
목적 구건열휴극단백(HSP)70화종류고환항원NY-ESO-1융합기인,병재대장간균중유도표체. 방법 응용역전록취합매련반응(RT-PCR)기술,종인간암세포주HepG2확증HSP70기인,측서후삽입pGEX-ESO1질립중,구건NY-ESO-1여HSP70적N단융합기인원핵표체질립pGEX-ESO1-HSP70,IPTG유도함유해질립적대장간균BL21(DE3)표체목적단백,Western blot 감정단백적특이성. 결과 확증득도장도위1 917 bp적인HSP70전장기인,측서결과표명여GenBank공포적서렬일치;획득pGEX-ESO1-HSP70융합기인원핵표체질립,경IPTG유도,재BL21(DE3)중표체분자량약106 kD적융합단백(포괄GST 26 kD,NY-ESO1 10 kD,HSP70 70 kD),Western blot검측해단백가여HSP70특이성결합. 결론 성공구건pGEX-ESO1-HSP70중조표체질립,병획득고효표체적ESO1-HSP70융합단백,위HSP70-다태역묘재종류면역치료중적작용전정기출.
