CAJ | 학술논문

香烟烟雾提取物对人呼吸道上皮细胞DNA损伤和凋亡的影响
향연연무제취물대인호흡도상피세포DNA손상화조망적영향
DNA Damage and Apoptosis of Human Airway Epithelial Cell Lines Caused by Cigarette Smoke Extract

万方数据

癌症癌癥 암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2006年 10期 1191-1197 ,共7页

付强%成静%韩中博%李小兰%陈小燕%张鹏%肖徽%陶德定%胡俊波%龚建平

부강%성정%한중박%리소란%진소연%장붕%초휘%도덕정%호준파%공건평

肺肿瘤/化学诱导%香烟烟雾提取物/毒性%γ-H2AX%DNA损伤%凋亡%流式细胞术肺腫瘤/化學誘導%香煙煙霧提取物/毒性%γ-H2AX%DNA損傷%凋亡%流式細胞術
폐종류/화학유도%향연연무제취물/독성%γ-H2AX%DNA손상%조망%류식세포술

背景与目的:香烟烟雾可以致多种细胞发生DNA损伤已有报道证实.本研究旨在进一步阐明香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)作用于正常人类支气管上皮细胞系(normal human bronchial epithelial ceHs,NHBE)和肺腺癌细胞系SPC-A1后引起的DNA损伤和凋亡情况.方法:不同浓度的CSE作用于NHBE和SPC-A1细胞,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTF)检测两种细胞活性.荧光标记的磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)抗体特异性标记细胞核内DNA双链断裂(DNAdouble-strand breaks,DSBs)处的γ-H2AX,然后用流式细胞仪定量检测并分析DNA损伤.用免疫印迹检测γ-H2AX表达.同时,亚G1峰法(Sub G1 peak)和Annexin V-FITC/碘化丙啶双染色流式细胞术检测CSE诱导的细胞凋亡.用激光共聚焦显微镜观察细胞损伤和凋亡形态学变化.结果:MTF结果显示,随CSE浓度和作用时间增加,细胞活性均逐渐降低.CSE可引起细胞DNA双链断裂,γ-H2AX最大值在作用后4 h左右,然后逐渐降低.DNA损伤后平均12 h可以出现凋亡.另外,激光共聚焦显微镜观察到两种细胞内的γ-H2AX量在细胞受到CSE刺激后快速大量的积聚,呈现典型细胞损伤的形态学变化,较为明显的凋亡形态学特征4 h后方可出现.结论:CSE能直接引起NHBE和SPC-A1细胞的DNA损伤和凋亡,且存在着浓度和时间依赖关系.
배경여목적:향연연무가이치다충세포발생DNA손상이유보도증실.본연구지재진일보천명향연연무제취물(cigarette smoke extract,CSE)작용우정상인류지기관상피세포계(normal human bronchial epithelial ceHs,NHBE)화폐선암세포계SPC-A1후인기적DNA손상화조망정황.방법:불동농도적CSE작용우NHBE화SPC-A1세포,용사갑기우담서염비색법(MTF)검측량충세포활성.형광표기적린산화H2AX조단백(γ-H2AX)항체특이성표기세포핵내DNA쌍련단렬(DNAdouble-strand breaks,DSBs)처적γ-H2AX,연후용류식세포의정량검측병분석DNA손상.용면역인적검측γ-H2AX표체.동시,아G1봉법(Sub G1 peak)화Annexin V-FITC/전화병정쌍염색류식세포술검측CSE유도적세포조망.용격광공취초현미경관찰세포손상화조망형태학변화.결과:MTF결과현시,수CSE농도화작용시간증가,세포활성균축점강저.CSE가인기세포DNA쌍련단렬,γ-H2AX최대치재작용후4 h좌우,연후축점강저.DNA손상후평균12 h가이출현조망.령외,격광공취초현미경관찰도량충세포내적γ-H2AX량재세포수도CSE자격후쾌속대량적적취,정현전형세포손상적형태학변화,교위명현적조망형태학특정4 h후방가출현.결론:CSE능직접인기NHBE화SPC-A1세포적DNA손상화조망,차존재착농도화시간의뢰관계.