军医进修学院学报
軍醫進脩學院學報
군의진수학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF PLA POSTGRADUATE MEDICAL SCHOOL
2008年
3期
211-213
,共3页
王春杨%吴元明%洪宝发%符伟军%孙圣坤%陈苏民
王春楊%吳元明%洪寶髮%符偉軍%孫聖坤%陳囌民
왕춘양%오원명%홍보발%부위군%손골곤%진소민
克隆细胞%真核细胞%基因表达载体%载体蛋白
剋隆細胞%真覈細胞%基因錶達載體%載體蛋白
극륭세포%진핵세포%기인표체재체%재체단백
目的:构建人UROC28基因的真核表达载体,观察其在HEK293细胞中的表达.方法:以PUC-19-UROC28质粒为模板,扩增UROC28基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pcDNA3中,酶切鉴定目的基因.重组质粒用脂质体转染HEK293细胞,Western blot观察基因表达情况.结果: PCR扩增的特异性片段长度为430bp,以此构建的重组质粒pcDNA3-UROC28, 经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5.4kb和430bp左右的两条片段,测序结果与GenBank中的人UROC28cds序列一致.证明UROC28因已成功克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3中.Western blot证实pcDNA3-UROC28转染HEK293细胞 24 h 后有UROC28的表达.结论:成功构建了pcDNA3-UROC28重组真核表达载体,并在HEK293细胞中表达.
目的:構建人UROC28基因的真覈錶達載體,觀察其在HEK293細胞中的錶達.方法:以PUC-19-UROC28質粒為模闆,擴增UROC28基因編碼區的全部序列,剋隆入真覈細胞錶達載體pcDNA3中,酶切鑒定目的基因.重組質粒用脂質體轉染HEK293細胞,Western blot觀察基因錶達情況.結果: PCR擴增的特異性片段長度為430bp,以此構建的重組質粒pcDNA3-UROC28, 經EcoRⅠ和XbaⅠ雙酶切後顯示5.4kb和430bp左右的兩條片段,測序結果與GenBank中的人UROC28cds序列一緻.證明UROC28因已成功剋隆到瞭真覈細胞錶達載體pcDNA3中.Western blot證實pcDNA3-UROC28轉染HEK293細胞 24 h 後有UROC28的錶達.結論:成功構建瞭pcDNA3-UROC28重組真覈錶達載體,併在HEK293細胞中錶達.
목적:구건인UROC28기인적진핵표체재체,관찰기재HEK293세포중적표체.방법:이PUC-19-UROC28질립위모판,확증UROC28기인편마구적전부서렬,극륭입진핵세포표체재체pcDNA3중,매절감정목적기인.중조질립용지질체전염HEK293세포,Western blot관찰기인표체정황.결과: PCR확증적특이성편단장도위430bp,이차구건적중조질립pcDNA3-UROC28, 경EcoRⅠ화XbaⅠ쌍매절후현시5.4kb화430bp좌우적량조편단,측서결과여GenBank중적인UROC28cds서렬일치.증명UROC28인이성공극륭도료진핵세포표체재체pcDNA3중.Western blot증실pcDNA3-UROC28전염HEK293세포 24 h 후유UROC28적표체.결론:성공구건료pcDNA3-UROC28중조진핵표체재체,병재HEK293세포중표체.
