血栓与止血学
血栓與止血學
혈전여지혈학
CHINESE JOURNAL OF THROMBOSIS AND HEMOSTASIS
2008年
5期
197-204
,共8页
杨镇军%陆东风%欧念文%胡德喜
楊鎮軍%陸東風%歐唸文%鬍德喜
양진군%륙동풍%구념문%호덕희
心肌干细胞%粒细胞集落刺激因子%心肌再生
心肌榦細胞%粒細胞集落刺激因子%心肌再生
심기간세포%립세포집락자격인자%심기재생
目的 了解新生小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSCs)在体外的分化潜能,为重建缺血及坏死心肌的临床应用提供依据.方法 采用组织块贴壁法体外培养小鼠CSCs,以免疫磁珠细胞分离(MACS)系统纯化原代细胞.纯化所得细胞分别予4个浓度的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)进行诱导,应用流式细胞术(FCM)、免疫荧光染色(IFS)鉴定细胞表型,RT-PCR检测心肌转录因子GATA-4与心肌结构基因p-MHC的表达.结果 由组织块培养所得的原代细胞经FCM、IFS检测证实其部分表达Sca-1和CD 45.采用MACS成功得到高纯度的细胞,行FCM、IFS鉴定其表型为Sca-1+/CD 45-,RT-PCR检测显示其表达GATA-4,不表达β-MHC.纯化的细胞予诱导后培养3周,整个培养过程未见单个或成团细胞的自发搏动.诱导后3周各组细胞再次经FCM检测见Sca-1的表达均比诱导前减弱,RT-PCR检测见诱导后的细胞仍然不表达β-MHC.结论 应用MACS后成功得到高纯度的表型为Sca-1+/CD 45-的CSCs;CSCs Sca-1的表达量可能随培养时间的延长而下降;G-CSF未能将CSCs诱导分化为心肌细胞.
目的 瞭解新生小鼠心肌榦細胞(cardiac stem cells,CSCs)在體外的分化潛能,為重建缺血及壞死心肌的臨床應用提供依據.方法 採用組織塊貼壁法體外培養小鼠CSCs,以免疫磁珠細胞分離(MACS)繫統純化原代細胞.純化所得細胞分彆予4箇濃度的粒細胞集落刺激因子(G-CSF)進行誘導,應用流式細胞術(FCM)、免疫熒光染色(IFS)鑒定細胞錶型,RT-PCR檢測心肌轉錄因子GATA-4與心肌結構基因p-MHC的錶達.結果 由組織塊培養所得的原代細胞經FCM、IFS檢測證實其部分錶達Sca-1和CD 45.採用MACS成功得到高純度的細胞,行FCM、IFS鑒定其錶型為Sca-1+/CD 45-,RT-PCR檢測顯示其錶達GATA-4,不錶達β-MHC.純化的細胞予誘導後培養3週,整箇培養過程未見單箇或成糰細胞的自髮搏動.誘導後3週各組細胞再次經FCM檢測見Sca-1的錶達均比誘導前減弱,RT-PCR檢測見誘導後的細胞仍然不錶達β-MHC.結論 應用MACS後成功得到高純度的錶型為Sca-1+/CD 45-的CSCs;CSCs Sca-1的錶達量可能隨培養時間的延長而下降;G-CSF未能將CSCs誘導分化為心肌細胞.
목적 료해신생소서심기간세포(cardiac stem cells,CSCs)재체외적분화잠능,위중건결혈급배사심기적림상응용제공의거.방법 채용조직괴첩벽법체외배양소서CSCs,이면역자주세포분리(MACS)계통순화원대세포.순화소득세포분별여4개농도적립세포집락자격인자(G-CSF)진행유도,응용류식세포술(FCM)、면역형광염색(IFS)감정세포표형,RT-PCR검측심기전록인자GATA-4여심기결구기인p-MHC적표체.결과 유조직괴배양소득적원대세포경FCM、IFS검측증실기부분표체Sca-1화CD 45.채용MACS성공득도고순도적세포,행FCM、IFS감정기표형위Sca-1+/CD 45-,RT-PCR검측현시기표체GATA-4,불표체β-MHC.순화적세포여유도후배양3주,정개배양과정미견단개혹성단세포적자발박동.유도후3주각조세포재차경FCM검측견Sca-1적표체균비유도전감약,RT-PCR검측견유도후적세포잉연불표체β-MHC.결론 응용MACS후성공득도고순도적표형위Sca-1+/CD 45-적CSCs;CSCs Sca-1적표체량가능수배양시간적연장이하강;G-CSF미능장CSCs유도분화위심기세포.
