中山大学学报（医学科学版）
中山大學學報（醫學科學版）
중산대학학보（의학과학판）
JOURNAL OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
2期
232-236
,共5页
赖文玉%岑丹阳%曾巧慧%刘畅%王鹏%周敦华%李文益
賴文玉%岑丹暘%曾巧慧%劉暢%王鵬%週敦華%李文益
뢰문옥%잠단양%증교혜%류창%왕붕%주돈화%리문익
间充质干细胞%增强型绿色荧光蛋白%CM-DiI%细胞示踪
間充質榦細胞%增彊型綠色熒光蛋白%CM-DiI%細胞示蹤
간충질간세포%증강형록색형광단백%CM-DiI%세포시종
[目的]探讨荧光染料CM-DiI直接标记和慢病毒感染法EGFP标记人骨髓间充质干细胞(hMSC)用于体内示踪的优缺点.[方法]利用FUGW质粒构建携带EGFP基因的慢病毒载体.并感染P3代hMSC,荧光倒置显微镜下观察细胞的感染效果及传代前后细胞EGFP表达情况的变化;CM-DiI直接标记P3代hMSC,观察CM-DiI标记对细胞生物学特性的影响及传代前后细胞标记效果的变化.分别将CM-DiI和EGFP标记的P3代hMSC移植入新生大鼠左侧脑室,2周后取大鼠脑组织行冰冻切片,比较两种标记方法用于体内示踪的效果.[结果]慢病毒感染hMSC 48 h后,约40%细胞表达绿色荧光,体外培养1个月,EGFP阳性细胞数增至50%左右,荧光强度基本保持不变,细胞生长不受病毒转染的影响.CM-DiI标记hMSC 12 h后,95%以上细胞呈现很强的红色荧光,1个月后,阳性细胞减少至50%左右,荧光强度也有一定程度降低,未见染料对细胞形态和生长产生明显影响.CM-DiI标记的hMSC移植后2周脑冰冻切片可以找到红色荧光的标记细胞,EGFP标记的hMSC移植后2周脑冰冻切片未找到绿色荧光细胞.[结论]CM-DiI和EGFP均可在体外高效标记hMSC,但CM-DiI标记的hMSC体内示踪效果优于EGFP标记.
[目的]探討熒光染料CM-DiI直接標記和慢病毒感染法EGFP標記人骨髓間充質榦細胞(hMSC)用于體內示蹤的優缺點.[方法]利用FUGW質粒構建攜帶EGFP基因的慢病毒載體.併感染P3代hMSC,熒光倒置顯微鏡下觀察細胞的感染效果及傳代前後細胞EGFP錶達情況的變化;CM-DiI直接標記P3代hMSC,觀察CM-DiI標記對細胞生物學特性的影響及傳代前後細胞標記效果的變化.分彆將CM-DiI和EGFP標記的P3代hMSC移植入新生大鼠左側腦室,2週後取大鼠腦組織行冰凍切片,比較兩種標記方法用于體內示蹤的效果.[結果]慢病毒感染hMSC 48 h後,約40%細胞錶達綠色熒光,體外培養1箇月,EGFP暘性細胞數增至50%左右,熒光彊度基本保持不變,細胞生長不受病毒轉染的影響.CM-DiI標記hMSC 12 h後,95%以上細胞呈現很彊的紅色熒光,1箇月後,暘性細胞減少至50%左右,熒光彊度也有一定程度降低,未見染料對細胞形態和生長產生明顯影響.CM-DiI標記的hMSC移植後2週腦冰凍切片可以找到紅色熒光的標記細胞,EGFP標記的hMSC移植後2週腦冰凍切片未找到綠色熒光細胞.[結論]CM-DiI和EGFP均可在體外高效標記hMSC,但CM-DiI標記的hMSC體內示蹤效果優于EGFP標記.
[목적]탐토형광염료CM-DiI직접표기화만병독감염법EGFP표기인골수간충질간세포(hMSC)용우체내시종적우결점.[방법]이용FUGW질립구건휴대EGFP기인적만병독재체.병감염P3대hMSC,형광도치현미경하관찰세포적감염효과급전대전후세포EGFP표체정황적변화;CM-DiI직접표기P3대hMSC,관찰CM-DiI표기대세포생물학특성적영향급전대전후세포표기효과적변화.분별장CM-DiI화EGFP표기적P3대hMSC이식입신생대서좌측뇌실,2주후취대서뇌조직행빙동절편,비교량충표기방법용우체내시종적효과.[결과]만병독감염hMSC 48 h후,약40%세포표체록색형광,체외배양1개월,EGFP양성세포수증지50%좌우,형광강도기본보지불변,세포생장불수병독전염적영향.CM-DiI표기hMSC 12 h후,95%이상세포정현흔강적홍색형광,1개월후,양성세포감소지50%좌우,형광강도야유일정정도강저,미견염료대세포형태화생장산생명현영향.CM-DiI표기적hMSC이식후2주뇌빙동절편가이조도홍색형광적표기세포,EGFP표기적hMSC이식후2주뇌빙동절편미조도록색형광세포.[결론]CM-DiI화EGFP균가재체외고효표기hMSC,단CM-DiI표기적hMSC체내시종효과우우EGFP표기.
