北京理工大学学报
北京理工大學學報
북경리공대학학보
JOURNAL OF BEIJING INSTITUTE OF TECHNOLOGY
2011年
2期
240-243
,共4页
谷胱甘肽%6聚组氨酸%基因重组%蛋白表达与纯化%亲和吸附
穀胱甘肽%6聚組氨痠%基因重組%蛋白錶達與純化%親和吸附
곡광감태%6취조안산%기인중조%단백표체여순화%친화흡부
以pET-28a(+)载体为模板人工设计引物,通过PCR反应扩增带有质粒上游6聚组氨酸(6×Histidine)序列的目的基因片段,克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,筛选及鉴定阳性重组子pGEX-His,转化E.coli BL21细胞后通过IPTG诱导表达.由谷胱甘肽(GST)和6聚组氨酸标记的重组蛋白GST-His得到表达,利用Ni-NTA系统进行纯化.通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析鉴定,由LC-MS/MS质谱分析确定所得蛋白为目标产物.通过蛋白结合纳米无机材料的亲和吸附实验结果证实,重组的新蛋白表现出对纳米ZnO特异吸附的生物活性.
以pET-28a(+)載體為模闆人工設計引物,通過PCR反應擴增帶有質粒上遊6聚組氨痠(6×Histidine)序列的目的基因片段,剋隆到原覈錶達載體pGEX-4T-3中,篩選及鑒定暘性重組子pGEX-His,轉化E.coli BL21細胞後通過IPTG誘導錶達.由穀胱甘肽(GST)和6聚組氨痠標記的重組蛋白GST-His得到錶達,利用Ni-NTA繫統進行純化.通過SDS-PAGE電泳和Western blot分析鑒定,由LC-MS/MS質譜分析確定所得蛋白為目標產物.通過蛋白結閤納米無機材料的親和吸附實驗結果證實,重組的新蛋白錶現齣對納米ZnO特異吸附的生物活性.
이pET-28a(+)재체위모판인공설계인물,통과PCR반응확증대유질립상유6취조안산(6×Histidine)서렬적목적기인편단,극륭도원핵표체재체pGEX-4T-3중,사선급감정양성중조자pGEX-His,전화E.coli BL21세포후통과IPTG유도표체.유곡광감태(GST)화6취조안산표기적중조단백GST-His득도표체,이용Ni-NTA계통진행순화.통과SDS-PAGE전영화Western blot분석감정,유LC-MS/MS질보분석학정소득단백위목표산물.통과단백결합납미무궤재료적친화흡부실험결과증실,중조적신단백표현출대납미ZnO특이흡부적생물활성.
