国际眼科杂志
國際眼科雜誌
국제안과잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF OPHTHALMOLOGY
2011年
11期
1890-1892
,共3页
乔芳%傅培%张芳婷%李明华%李金瑛%伍友春
喬芳%傅培%張芳婷%李明華%李金瑛%伍友春
교방%부배%장방정%리명화%리금영%오우춘
转化生长因子-β2%siRNA载体%质粒构建
轉化生長因子-β2%siRNA載體%質粒構建
전화생장인자-β2%siRNA재체%질립구건
目的:构建人TGF-β2特异性siRNA质粒.方法:从NCBI中查找人TGF-β2的mRNA序列,并利用生物信息学对序列进行分析;根据siRNA的设计原则,选择最佳的siRNA序列;利用限制性内切酶BamH Ⅰ和Bbs Ⅰ将相应的双链DNA插入到GPU6/GFP/Neo载体中;重组质粒经限制性内切酶BamH Ⅰ和Pst Ⅰ单酶切进行鉴定,鉴定正确的质粒进一步通过基因测序的方法进行验证.结果:根据生物信息学选择TGF-β2mRNA的1 016~1 034区域作为干扰位点;重组质粒酶切结果表明双链DNA序列成功插入到了GPU6/GFP/Neo载体中;测序分析结果进一步证明插入序列与设计完全一致.结论:成功构建了人TGF-β2特异性siRNA干扰质粒,为研究TGF-β2基因功能和利用基因治疗的方法提高青光眼滤过手术成功率奠定了实验基础.
目的:構建人TGF-β2特異性siRNA質粒.方法:從NCBI中查找人TGF-β2的mRNA序列,併利用生物信息學對序列進行分析;根據siRNA的設計原則,選擇最佳的siRNA序列;利用限製性內切酶BamH Ⅰ和Bbs Ⅰ將相應的雙鏈DNA插入到GPU6/GFP/Neo載體中;重組質粒經限製性內切酶BamH Ⅰ和Pst Ⅰ單酶切進行鑒定,鑒定正確的質粒進一步通過基因測序的方法進行驗證.結果:根據生物信息學選擇TGF-β2mRNA的1 016~1 034區域作為榦擾位點;重組質粒酶切結果錶明雙鏈DNA序列成功插入到瞭GPU6/GFP/Neo載體中;測序分析結果進一步證明插入序列與設計完全一緻.結論:成功構建瞭人TGF-β2特異性siRNA榦擾質粒,為研究TGF-β2基因功能和利用基因治療的方法提高青光眼濾過手術成功率奠定瞭實驗基礎.
목적:구건인TGF-β2특이성siRNA질립.방법:종NCBI중사조인TGF-β2적mRNA서렬,병이용생물신식학대서렬진행분석;근거siRNA적설계원칙,선택최가적siRNA서렬;이용한제성내절매BamH Ⅰ화Bbs Ⅰ장상응적쌍련DNA삽입도GPU6/GFP/Neo재체중;중조질립경한제성내절매BamH Ⅰ화Pst Ⅰ단매절진행감정,감정정학적질립진일보통과기인측서적방법진행험증.결과:근거생물신식학선택TGF-β2mRNA적1 016~1 034구역작위간우위점;중조질립매절결과표명쌍련DNA서렬성공삽입도료GPU6/GFP/Neo재체중;측서분석결과진일보증명삽입서렬여설계완전일치.결론:성공구건료인TGF-β2특이성siRNA간우질립,위연구TGF-β2기인공능화이용기인치료적방법제고청광안려과수술성공솔전정료실험기출.
