中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2011年
9期
28-30
,共3页
杜金苓%韩红兵%张宝路%连正兴
杜金苓%韓紅兵%張寶路%連正興
두금령%한홍병%장보로%련정흥
sTLR4基因%转染%定位%绵羊
sTLR4基因%轉染%定位%綿羊
sTLR4기인%전염%정위%면양
采用RT-PCR方法克隆绵羊TLR4基因的一种新型剪接体形式sTLR4,将sTLR4与EGFP构建融合蛋白表达载体.用EcoR I和Sma I分别双酶切质粒pEGFP-N1和sTLR4基因的PCR产物,采用T4连接酶进行连接,将质粒转4ETOP10菌株,挑取阳性克隆采用AgeI和VspI对质粒进行双酶切鉴定.经鉴定的质粒采用电击方法转染胎儿成纤维细胞,在激光共聚焦显微镜下观察sTLR4蛋白在成纤维细胞中的定位情况.结果表明:构建的融合蛋白pEGFP-N1-sTLR4能够在成纤维细胞中正常工作,且sTLR4-EGFP融合蛋白可以在细胞膜上表达.
採用RT-PCR方法剋隆綿羊TLR4基因的一種新型剪接體形式sTLR4,將sTLR4與EGFP構建融閤蛋白錶達載體.用EcoR I和Sma I分彆雙酶切質粒pEGFP-N1和sTLR4基因的PCR產物,採用T4連接酶進行連接,將質粒轉4ETOP10菌株,挑取暘性剋隆採用AgeI和VspI對質粒進行雙酶切鑒定.經鑒定的質粒採用電擊方法轉染胎兒成纖維細胞,在激光共聚焦顯微鏡下觀察sTLR4蛋白在成纖維細胞中的定位情況.結果錶明:構建的融閤蛋白pEGFP-N1-sTLR4能夠在成纖維細胞中正常工作,且sTLR4-EGFP融閤蛋白可以在細胞膜上錶達.
채용RT-PCR방법극륭면양TLR4기인적일충신형전접체형식sTLR4,장sTLR4여EGFP구건융합단백표체재체.용EcoR I화Sma I분별쌍매절질립pEGFP-N1화sTLR4기인적PCR산물,채용T4련접매진행련접,장질립전4ETOP10균주,도취양성극륭채용AgeI화VspI대질립진행쌍매절감정.경감정적질립채용전격방법전염태인성섬유세포,재격광공취초현미경하관찰sTLR4단백재성섬유세포중적정위정황.결과표명:구건적융합단백pEGFP-N1-sTLR4능구재성섬유세포중정상공작,차sTLR4-EGFP융합단백가이재세포막상표체.
