温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2012年
5期
453-457
,共5页
To12转座子%斑马鱼%multi-site gateway技术%肝脏特异性表达
To12轉座子%斑馬魚%multi-site gateway技術%肝髒特異性錶達
To12전좌자%반마어%multi-site gateway기술%간장특이성표체
目的:建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的新方法.方法:首先利用multi-site gateway技术将斑马鱼肝脏脂肪酸结合蛋白(fabp10a)启动子片段与入门载体进行BP重组获得启动子的入门克隆pENTR-fabp10a,然后将目的基因克隆到载体pME-MCS中形成入门克隆pENTR-interest,最后通过multi-site gateway技术将pENTR-fabp10a、pENTR-interest和含有EGFP标记基因的p3E-IRES-EGFPpA质粒在To12转座载体pDestTo12pA2上进行定向重组即可获得斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体pTo12-fabp10a-interest-IRES-EGFP.本研究采用红色荧光蛋白基因DsRed2作为目的基因,用上述方法构建了转基因载体pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP,并将其注射至单细胞期斑马鱼胚胎中进行表达分析.结果:转基因载体pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP在斑马鱼肝脏组织中能实现红色和绿色荧光蛋白同步特异表达.结论:利用To12转座系统以及multi-site gateway技术构建斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体是一套行之有效的方法.
目的:建立一套快速製備斑馬魚肝髒特異錶達轉基因載體的新方法.方法:首先利用multi-site gateway技術將斑馬魚肝髒脂肪痠結閤蛋白(fabp10a)啟動子片段與入門載體進行BP重組穫得啟動子的入門剋隆pENTR-fabp10a,然後將目的基因剋隆到載體pME-MCS中形成入門剋隆pENTR-interest,最後通過multi-site gateway技術將pENTR-fabp10a、pENTR-interest和含有EGFP標記基因的p3E-IRES-EGFPpA質粒在To12轉座載體pDestTo12pA2上進行定嚮重組即可穫得斑馬魚肝髒特異性錶達轉基因載體pTo12-fabp10a-interest-IRES-EGFP.本研究採用紅色熒光蛋白基因DsRed2作為目的基因,用上述方法構建瞭轉基因載體pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP,併將其註射至單細胞期斑馬魚胚胎中進行錶達分析.結果:轉基因載體pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP在斑馬魚肝髒組織中能實現紅色和綠色熒光蛋白同步特異錶達.結論:利用To12轉座繫統以及multi-site gateway技術構建斑馬魚肝髒特異性錶達轉基因載體是一套行之有效的方法.
목적:건립일투쾌속제비반마어간장특이표체전기인재체적신방법.방법:수선이용multi-site gateway기술장반마어간장지방산결합단백(fabp10a)계동자편단여입문재체진행BP중조획득계동자적입문극륭pENTR-fabp10a,연후장목적기인극륭도재체pME-MCS중형성입문극륭pENTR-interest,최후통과multi-site gateway기술장pENTR-fabp10a、pENTR-interest화함유EGFP표기기인적p3E-IRES-EGFPpA질립재To12전좌재체pDestTo12pA2상진행정향중조즉가획득반마어간장특이성표체전기인재체pTo12-fabp10a-interest-IRES-EGFP.본연구채용홍색형광단백기인DsRed2작위목적기인,용상술방법구건료전기인재체pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP,병장기주사지단세포기반마어배태중진행표체분석.결과:전기인재체pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP재반마어간장조직중능실현홍색화록색형광단백동보특이표체.결론:이용To12전좌계통이급multi-site gateway기술구건반마어간장특이성표체전기인재체시일투행지유효적방법.
