中华皮肤科杂志
中華皮膚科雜誌
중화피부과잡지
Chinese Journal of Dermatology
2006年
4期
200-203
,共4页
殷河慧%廖文俊%王岩%谢杨新%高天文
慇河慧%廖文俊%王巖%謝楊新%高天文
은하혜%료문준%왕암%사양신%고천문
RNA干扰%黑色素瘤%基因表达%淋巴样增强因子
RNA榦擾%黑色素瘤%基因錶達%淋巴樣增彊因子
RNA간우%흑색소류%기인표체%림파양증강인자
目的利用RNA干扰技术,以淋巴样增强因子(LEF-1)为靶基因,设计、构建重组体,研究其对人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达的抑制作用.方法设计、合成针对LEF-1 mRNA序列的有小发夹结构的正义和反义寡核苷酸,退火后与表达载体Psilencer3.1-H1 neo相连接,经鉴定正确后转染人恶性黑素瘤细胞A375,以G418筛选,获得稳定转染细胞株,分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和免疫细胞化学方法检测转染细胞中LEF-1 mRNA及蛋白表达水平的改变.结果成功构建了靶向人LEF-1基因的siRNA表达载体,获得稳定转染细胞株,转染细胞LEF-1 mRNA及蛋白水平明显下调.结论靶向LEF-1的RNA干扰重组体可抑制人恶性黑素瘤细胞A375中LEF-1表达.
目的利用RNA榦擾技術,以淋巴樣增彊因子(LEF-1)為靶基因,設計、構建重組體,研究其對人噁性黑素瘤細胞A375中LEF-1錶達的抑製作用.方法設計、閤成針對LEF-1 mRNA序列的有小髮夾結構的正義和反義寡覈苷痠,退火後與錶達載體Psilencer3.1-H1 neo相連接,經鑒定正確後轉染人噁性黑素瘤細胞A375,以G418篩選,穫得穩定轉染細胞株,分彆以逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)、蛋白質印跡法(Western blot)和免疫細胞化學方法檢測轉染細胞中LEF-1 mRNA及蛋白錶達水平的改變.結果成功構建瞭靶嚮人LEF-1基因的siRNA錶達載體,穫得穩定轉染細胞株,轉染細胞LEF-1 mRNA及蛋白水平明顯下調.結論靶嚮LEF-1的RNA榦擾重組體可抑製人噁性黑素瘤細胞A375中LEF-1錶達.
목적이용RNA간우기술,이림파양증강인자(LEF-1)위파기인,설계、구건중조체,연구기대인악성흑소류세포A375중LEF-1표체적억제작용.방법설계、합성침대LEF-1 mRNA서렬적유소발협결구적정의화반의과핵감산,퇴화후여표체재체Psilencer3.1-H1 neo상련접,경감정정학후전염인악성흑소류세포A375,이G418사선,획득은정전염세포주,분별이역전록취합매련반응(RT-PCR)、단백질인적법(Western blot)화면역세포화학방법검측전염세포중LEF-1 mRNA급단백표체수평적개변.결과성공구건료파향인LEF-1기인적siRNA표체재체,획득은정전염세포주,전염세포LEF-1 mRNA급단백수평명현하조.결론파향LEF-1적RNA간우중조체가억제인악성흑소류세포A375중LEF-1표체.
