中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2012年
9期
869-874
,共6页
刘志国%罗成旺%张利%姜海%赵鸿雁%朴东日%田国忠%崔步云
劉誌國%囉成旺%張利%薑海%趙鴻雁%樸東日%田國忠%崔步雲
류지국%라성왕%장리%강해%조홍안%박동일%전국충%최보운
布鲁氏菌%荧光定量聚合酶链式反应%鉴定%评价
佈魯氏菌%熒光定量聚閤酶鏈式反應%鑒定%評價
포로씨균%형광정량취합매련식반응%감정%평개
目的 利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法.方法 根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度.利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性.通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证.结果 应用多重TaqMan荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL(13~24 fg /μL),是常规PCR灵敏度的100倍.结论 建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌.
目的 利用多重實時熒光PCR技術,建立快速鑒定佈魯氏菌的方法.方法 根據佈魯氏菌特異性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作為靶基因,分彆設計探針引物,將擴增產物連接到PUCm18-T載體上,製備標準品及標準麯線,確定此方法的靈敏度.利用佈魯氏菌的其他生物型菌株和同源性較近的緻病菌(漢賽巴爾通體、霍亂弧菌、土拉弗朗西斯菌、大腸桿菌O157∶H7、大腸桿菌O∶16、小腸結腸炎耶爾森菌O∶9、沙門氏菌N群血清型、嗜麥芽假單胞菌)驗證所建立方法的特異性.通過佈魯氏菌標準菌株建立方法,優化體繫後擴增97株地方株進行驗證.結果 應用多重TaqMan熒光PCR技術檢測佈魯氏菌結果顯示,佈魯氏菌屬、牛種佈魯氏菌和羊種佈魯氏菌有各自的熒光信號,而與其同源性較高的緻病菌均未見熒光信號;由標準麯線可知該方法的單重和多重熒光PCR最低檢測下限均約為102copy/μL(13~24 fg /μL),是常規PCR靈敏度的100倍.結論 建立的方法有靈敏度高、快速易操作等優點,可用于佈魯氏菌快速鑒定,併同時確定是否為牛種或羊種佈魯氏菌.
목적 이용다중실시형광PCR기술,건립쾌속감정포로씨균적방법.방법 근거포로씨균특이성기인BCSP31,AlkB/IS711화BMEI1162/IS711적부분편단작위파기인,분별설계탐침인물,장확증산물련접도PUCm18-T재체상,제비표준품급표준곡선,학정차방법적령민도.이용포로씨균적기타생물형균주화동원성교근적치병균(한새파이통체、곽란호균、토랍불랑서사균、대장간균O157∶H7、대장간균O∶16、소장결장염야이삼균O∶9、사문씨균N군혈청형、기맥아가단포균)험증소건립방법적특이성.통과포로씨균표준균주건립방법,우화체계후확증97주지방주진행험증.결과 응용다중TaqMan형광PCR기술검측포로씨균결과현시,포로씨균속、우충포로씨균화양충포로씨균유각자적형광신호,이여기동원성교고적치병균균미견형광신호;유표준곡선가지해방법적단중화다중형광PCR최저검측하한균약위102copy/μL(13~24 fg /μL),시상규PCR령민도적100배.결론 건립적방법유령민도고、쾌속역조작등우점,가용우포로씨균쾌속감정,병동시학정시부위우충혹양충포로씨균.
